作者chiangmi (江咪)
看板Biotech
標題[求救] MTT ASSAY 吸光值不穩定
時間Tue Feb 2 16:32:10 2010
大家好
最近我在養HT-29(大腸癌細胞)
HT-29 目前在做 我的樣品對於這株細胞之存活率影響
我的樣品是乳酸菌加寡醣之發酵液(過濾後無菌液)
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由於實驗室很少人做細胞 所以不太有經驗
目前我在做MTT ASSAY
但是它吸光值都會乎大乎小
以下是我的步驟:
1. 每WELL種10^5細胞，貼附24小時
2. 24小時候加樣品，反應24小時
3. 吸出樣品，以PBS洗過一次
4. 加入MTT(溶於SF-MEDIUM)，反應4小時
5. 吸出MTT，以PBS洗一次，再加入DMSO，放置15分鐘測吸光值
我聽別人說 CONTROL(PBS)大約吸光值在0.8為正常
可是我的吸光值光是每個WELL的變異就超大
請問我大概會是哪步驟有問題或是出錯? 以至於變異大
又請問 每個樣品三重複 一個重複要LOAD幾個WELL比較好?
先謝謝大家了..
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.98.78
1F：推 LIAR:cell沒貼緊，被PBS沖掉？DMSO加太少，光徑相對誤差大？ 02/02 23:59
2F：→ LIAR:incubator水氣不足，不同位置的medium體積不同而有差？ 02/03 00:00
3F：→ LIAR:以上是我曾經遇過的問題 02/03 00:00
4F：→ chinolocal:我覺得有可能是你細胞數加的不準吧~"~ 02/03 09:45
5F：→ chinolocal:我最近也在做MTT，我是一次8重複，同樣的藥品要做3次 02/03 09:46