作者chiangmi (江咪)
看板Biotech
标题[求救] MTT ASSAY 吸光值不稳定
时间Tue Feb 2 16:32:10 2010
大家好
最近我在养HT-29(大肠癌细胞)
HT-29 目前在做 我的样品对於这株细胞之存活率影响
我的样品是乳酸菌加寡醣之发酵液(过滤後无菌液)
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由於实验室很少人做细胞 所以不太有经验
目前我在做MTT ASSAY
但是它吸光值都会乎大乎小
以下是我的步骤:
1. 每WELL种10^5细胞，贴附24小时
2. 24小时候加样品，反应24小时
3. 吸出样品，以PBS洗过一次
4. 加入MTT(溶於SF-MEDIUM)，反应4小时
5. 吸出MTT，以PBS洗一次，再加入DMSO，放置15分钟测吸光值
我听别人说 CONTROL(PBS)大约吸光值在0.8为正常
可是我的吸光值光是每个WELL的变异就超大
请问我大概会是哪步骤有问题或是出错? 以至於变异大
又请问 每个样品三重复 一个重复要LOAD几个WELL比较好?
先谢谢大家了..
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.98.78
1F：推 LIAR:cell没贴紧，被PBS冲掉？DMSO加太少，光径相对误差大？ 02/02 23:59
2F：→ LIAR:incubator水气不足，不同位置的medium体积不同而有差？ 02/03 00:00
3F：→ LIAR:以上是我曾经遇过的问题 02/03 00:00
4F：→ chinolocal:我觉得有可能是你细胞数加的不准吧~"~ 02/03 09:45
5F：→ chinolocal:我最近也在做MTT，我是一次8重复，同样的药品要做3次 02/03 09:46