作者lulusa (露露莎)
看板Biotech
標題[討論] 請問大家PCR XX加太多為何做不出來
時間Mon Feb 1 23:11:49 2010
常碰PCR的人 應該有聽過學長姐老師說過
DNA 加太多 會做不出來
dNTP加太多 會做不出來
Taq 加太多 會做不出來
primer加太多也會做不出來
能否請問大家
為何當我單項的東西加太多的時候就會做不出來呢?
我的意思是
我知道Taq加太多的時候 有一個原因是因為甘油太多干擾反應
那其他的solution呢?
謝謝回答
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.137.30.229
1F：推 glutamate:請考慮Non-specific binding 02/02 10:01
2F：推 oplz:因為太浪費 上天懲罰你 02/02 10:14
3F：→ oplz:把反應式推到極端 自然就不再有反應了 02/02 10:15
4F：推 icome:primer太多容易產生dimer DNA dNTP太多會有非專一反應 02/02 10:26
5F：→ icome:純屬推測 畢竟我沒嘗試也不想嘗試... 02/02 10:28
6F：推 hajimels:你可以下次就try一下 meeting問問你老闆XDDD 02/02 10:59
7F：→ hajimels:just kidding 我覺得會有1F和4F的情形 02/02 11:00
8F：推 jademan:一個和尚挑水喝,兩個和尚抬水喝,三個和尚沒水喝! 了解了嗎 02/02 11:59
9F：推 REIDO:dNTP 則和 Mg++有關 02/02 13:20
10F：→ lulusa:我老闆說他不知道捏~ 02/02 13:38
11F：推 silverberry:template 或是 dNTP 太多，會把反應中的 Mg2+ 搶走 02/02 13:51
12F：→ silverberry:如果 [Mg2+] 不足，會影響 taq 專一性，甚至反應不能 02/02 13:52
13F：→ silverberry:進行 (Mg2+ 是 cofactor) 02/02 13:53
14F：推 REIDO:我以為是Mg太多才"加速但專一下降" 02/02 17:14
15F：推 hc0122:我也以為鎂多 專一性降 02/06 00:13