作者lulusa (露露莎)
看板Biotech
标题[讨论] 请问大家PCR XX加太多为何做不出来
时间Mon Feb 1 23:11:49 2010
常碰PCR的人 应该有听过学长姐老师说过
DNA 加太多 会做不出来
dNTP加太多 会做不出来
Taq 加太多 会做不出来
primer加太多也会做不出来
能否请问大家
为何当我单项的东西加太多的时候就会做不出来呢?
我的意思是
我知道Taq加太多的时候 有一个原因是因为甘油太多干扰反应
那其他的solution呢?
谢谢回答
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.137.30.229
1F：推 glutamate:请考虑Non-specific binding 02/02 10:01
2F：推 oplz:因为太浪费 上天惩罚你 02/02 10:14
3F：→ oplz:把反应式推到极端 自然就不再有反应了 02/02 10:15
4F：推 icome:primer太多容易产生dimer DNA dNTP太多会有非专一反应 02/02 10:26
5F：→ icome:纯属推测 毕竟我没尝试也不想尝试... 02/02 10:28
6F：推 hajimels:你可以下次就try一下 meeting问问你老板XDDD 02/02 10:59
7F：→ hajimels:just kidding 我觉得会有1F和4F的情形 02/02 11:00
8F：推 jademan:一个和尚挑水喝,两个和尚抬水喝,三个和尚没水喝! 了解了吗 02/02 11:59
9F：推 REIDO:dNTP 则和 Mg++有关 02/02 13:20
10F：→ lulusa:我老板说他不知道捏~ 02/02 13:38
11F：推 silverberry:template 或是 dNTP 太多，会把反应中的 Mg2+ 抢走 02/02 13:51
12F：→ silverberry:如果 [Mg2+] 不足，会影响 taq 专一性，甚至反应不能 02/02 13:52
13F：→ silverberry:进行 (Mg2+ 是 cofactor) 02/02 13:53
14F：推 REIDO:我以为是Mg太多才"加速但专一下降" 02/02 17:14
15F：推 hc0122:我也以为镁多 专一性降 02/06 00:13