作者mrjameslee (whatever)
看板Biotech
標題[求救] 請問protein expression的a.a 片段大小
時間Mon Jan 25 17:05:06 2010
各位大大好，
小弟目前實驗遇到一個問題，就是用 E.coli 表現蛋白質是否蛋白質的大小不能太小?
我預計請廠商幫我合DNA template, 我在用pQE30帶到JM109裡。之後在轉到M15大量
表現。
現在的問題是我的東西只有16個a.a，如果template設計成48個nucleotide那表現出來
也只有16個a.a.，會不會無法expression?
我現在的想法是在每16個a.a 的nucleotide sequence中墊一個phenylalanine, 然後做
三重複---> 48-F-48-F-48, F代表phenylalanine的3個nucleotide。
這樣應該peptide大小不會太小，然後表現之後再用chymotrypsin切F的位置，就有很多
獨立的目標peptide了。
這個方法主要的問題是template會有很多個nucleotide, 合成template的價錢又是
$18*nucleotides+$350(purify/strand), 算起來一條要2996, 那豈不是template
就要幾十萬?
所以小弟小要請教各位大大是否16個mer的peptide就可以表現了，還是有更好的方法
來得到我的peptide? (p.s. 不考慮直接和成peptide不然我的論文就沒料了)
謝謝!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.51.248
1F：推 liuse:把你想的方法用PCR-based amplify 可以省很多錢 01/25 22:40
2F：推 inchew:我表現46AA OK!16AA沒試過不知道 不過只要是屬於正常的ORF 01/25 23:26
3F：→ inchew:(open reading frame)內的話應該是可以吧(可以問問看廠商) 01/25 23:27
4F：推 missal:試試看pET31 是peptide expression system 01/25 23:36