作者mrjameslee (whatever)
看板Biotech
标题[求救] 请问protein expression的a.a 片段大小
时间Mon Jan 25 17:05:06 2010
各位大大好，
小弟目前实验遇到一个问题，就是用 E.coli 表现蛋白质是否蛋白质的大小不能太小?
我预计请厂商帮我合DNA template, 我在用pQE30带到JM109里。之後在转到M15大量
表现。
现在的问题是我的东西只有16个a.a，如果template设计成48个nucleotide那表现出来
也只有16个a.a.，会不会无法expression?
我现在的想法是在每16个a.a 的nucleotide sequence中垫一个phenylalanine, 然後做
三重复---> 48-F-48-F-48, F代表phenylalanine的3个nucleotide。
这样应该peptide大小不会太小，然後表现之後再用chymotrypsin切F的位置，就有很多
独立的目标peptide了。
这个方法主要的问题是template会有很多个nucleotide, 合成template的价钱又是
$18*nucleotides+$350(purify/strand), 算起来一条要2996, 那岂不是template
就要几十万?
所以小弟小要请教各位大大是否16个mer的peptide就可以表现了，还是有更好的方法
来得到我的peptide? (p.s. 不考虑直接和成peptide不然我的论文就没料了)
谢谢!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.51.248
1F：推 liuse:把你想的方法用PCR-based amplify 可以省很多钱 01/25 22:40
2F：推 inchew:我表现46AA OK!16AA没试过不知道 不过只要是属於正常的ORF 01/25 23:26
3F：→ inchew:(open reading frame)内的话应该是可以吧(可以问问看厂商) 01/25 23:27
4F：推 missal:试试看pET31 是peptide expression system 01/25 23:36