作者galaxy325 (egg~*)
看板Biotech
標題[求救] mice的BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)沖灌抽取方式
時間Mon Jan 25 14:18:57 2010
不知是否有人做過小鼠的BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)?
目前我的實驗model為以ventilator所引發的肺部發炎反應為主
在刺激完之後，需要抽取BALF來進行細胞以及一些cytokine的分析
不知是否抽取的方式有問題，而導致control組的cell counting一直很不穩定
以下是我的實驗方式，希望有經驗的先進可以提供意見! 謝謝!!
1. 準備兩管0.5ml，已過濾(0.2 micro meter)過的1 X HBSS(Hanks balanced salt
solution) buffer
2. 小鼠麻醉氣切，並於氣管置入18G的catheter，並以尼龍線固定
3. 小鼠安樂死後開胸，並以1ml的針筒緩慢注入HBSS buffer並抽取，重複兩次並觀察肺
部膨脹情形與是否有液體滲出
4. 重複步驟三，完成第二管的抽取
5. 將兩管BALF混合成一管，並離心(500G,10分鐘)
<抽回的BALF總量約為0.7~0.8ml>
6. 上清液作為cytokine含量等之分析，而將pellet回溶於HBSS buffer，用以細胞計數
謝謝~
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◆ From: 140.117.33.196
1F：推 johanjohan:看起來是沒甚麼問題 回收率看起來也OK 01/25 17:20
2F：推 bigrat:我是用三管1ml，回收總量約2.5ml 01/25 23:09
3F：→ bigrat:小鼠狀況本身就不好控制，就是正常人也有可能感冒 01/25 23:11
4F：推 msda:我兩管0.5 幾乎可以全部回收 就是要慢慢抽吧 01/26 14:08