作者galaxy325 (egg~*)
看板Biotech
标题[求救] mice的BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)冲灌抽取方式
时间Mon Jan 25 14:18:57 2010
不知是否有人做过小鼠的BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)?
目前我的实验model为以ventilator所引发的肺部发炎反应为主
在刺激完之後，需要抽取BALF来进行细胞以及一些cytokine的分析
不知是否抽取的方式有问题，而导致control组的cell counting一直很不稳定
以下是我的实验方式，希望有经验的先进可以提供意见! 谢谢!!
1. 准备两管0.5ml，已过滤(0.2 micro meter)过的1 X HBSS(Hanks balanced salt
solution) buffer
2. 小鼠麻醉气切，并於气管置入18G的catheter，并以尼龙线固定
3. 小鼠安乐死後开胸，并以1ml的针筒缓慢注入HBSS buffer并抽取，重复两次并观察肺
部膨胀情形与是否有液体渗出
4. 重复步骤三，完成第二管的抽取
5. 将两管BALF混合成一管，并离心(500G,10分钟)
<抽回的BALF总量约为0.7~0.8ml>
6. 上清液作为cytokine含量等之分析，而将pellet回溶於HBSS buffer，用以细胞计数
谢谢~
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◆ From: 140.117.33.196
1F：推 johanjohan:看起来是没甚麽问题 回收率看起来也OK 01/25 17:20
2F：推 bigrat:我是用三管1ml，回收总量约2.5ml 01/25 23:09
3F：→ bigrat:小鼠状况本身就不好控制，就是正常人也有可能感冒 01/25 23:11
4F：推 msda:我两管0.5 几乎可以全部回收 就是要慢慢抽吧 01/26 14:08