作者DancingQue (DanceHaHaHa)
看板Biotech
標題[求救] 犧牲時灌流與否?福馬林固定的時間?
時間Wed Jan 20 23:59:20 2010
請教板上大大
如果要做肝臟,腎臟,肺臟三種器官的石蠟切片,
而檢體日後要做western blot,HE染色,免疫組織染色,
這樣動物犧牲時需要先用PBS或福馬林灌流嗎?
我知道灌了福馬林,就不能做western blot了。
但不灌流，多餘的血液（由其是肝腎）又會影響實驗結果！
因此不知如何克服上述問題？
順道想請問如果要做石蠟切片的免疫組織染色，
檢體要泡在10%福馬林中固定多久呢？聽說泡太久會無法做免疫組織染色！
謝謝！
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◆ From: 218.164.147.192
1F：→ vandia:要不要灌流我沒做過不確定,但是肺臟要抽氣固定喔(要沉下去) 01/21 11:05
2F：→ vandia:我能想到的是灌iced PBS,灌完快點取組織丟到固定液去.. 01/21 11:06
3F：推 KIKO880:我們家是先灌0.9%NaCl再灌4%PFA，灌過4%PFA之後已經fix了 01/21 17:35
4F：→ KIKO880:所以取樣的話就可以慢慢來~然後再泡4%PFA 4度C O/N~隔天 01/21 17:37
5F：→ KIKO880:就切片在IHC，學長說fix太久不能作IHC喔! 01/21 17:38
6F：推 wesby:我都是以七天為期限 超過效果就會不好 01/22 10:39
7F：→ allisa:先灌PBS去除血液再灌PFA固定 取完泡4%PFA不超過2天 01/22 15:18