作者wt1seven (PMS502)
看板Biotech
標題Re: [求救] clone不出來
時間Sat Jan 16 18:57:26 2010
PCR產物不是單一band，
還往下做，那僅能說一先天不良！
PCR條件可以的話，還是再試一下，
雜band儘量少一點，或是用切膠回收的當模版，
切酵素時間也許可再延長一些。
也許引子設計時的序列也影響到切的效率，
一般catalog上都有不同限制酵素最佳反應序列的列表
後頭那些方法中，要冰-20或4度那見仁見智，
我們實驗室除染色體外，一律冰-20，
能不能做出來對實驗室而言溫度不是問題，
轉形株沒plasmid，那一定是污染，
那可聞一下plate味道是否是E.coli
菌落型態是否為所謂半透明，菌落非正圓.....
常見的污染菌會有酸味，菌落較白與小與圓，
實驗你做的，問題說實在別人能幫得很有限，
畢竟從引子設計開始到最後轉形株的質體的中間過程，
經過許多步驟，每個步驟光打嘴泡都可以說出一堆原因，
最後還是要靠你自己！加油.....加油
十分迷惘時要靠聖經，將它抱在手邊....它是最值得信任的
Molecular cloning : a laboratory manual
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◆ From: 219.85.12.248
1F：推 jck0406:謝謝，所以transformation應該還要有plasmid嗎？ 01/16 19:19
2F：→ jck0406:plasmid是不是會長的小小的菌落。 01/16 19:19
3F：→ jck0406:因為primer不是我設計的，有必要重新設計嗎? 01/16 19:21
4F：推 liuse:PCR不是single band也還好吧 有符合的size出來就可以做 01/17 21:31