作者wt1seven (PMS502)
看板Biotech
标题Re: [求救] clone不出来
时间Sat Jan 16 18:57:26 2010
PCR产物不是单一band，
还往下做，那仅能说一先天不良！
PCR条件可以的话，还是再试一下，
杂band尽量少一点，或是用切胶回收的当模版，
切酵素时间也许可再延长一些。
也许引子设计时的序列也影响到切的效率，
一般catalog上都有不同限制酵素最佳反应序列的列表
後头那些方法中，要冰-20或4度那见仁见智，
我们实验室除染色体外，一律冰-20，
能不能做出来对实验室而言温度不是问题，
转形株没plasmid，那一定是污染，
那可闻一下plate味道是否是E.coli
菌落型态是否为所谓半透明，菌落非正圆.....
常见的污染菌会有酸味，菌落较白与小与圆，
实验你做的，问题说实在别人能帮得很有限，
毕竟从引子设计开始到最後转形株的质体的中间过程，
经过许多步骤，每个步骤光打嘴泡都可以说出一堆原因，
最後还是要靠你自己！加油.....加油
十分迷惘时要靠圣经，将它抱在手边....它是最值得信任的
Molecular cloning : a laboratory manual
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◆ From: 219.85.12.248
1F：推 jck0406:谢谢，所以transformation应该还要有plasmid吗？ 01/16 19:19
2F：→ jck0406:plasmid是不是会长的小小的菌落。 01/16 19:19
3F：→ jck0406:因为primer不是我设计的，有必要重新设计吗? 01/16 19:21
4F：推 liuse:PCR不是single band也还好吧 有符合的size出来就可以做 01/17 21:31