作者nkj21505 (~苹~)
看板Biotech
標題[求救] western 的band和SDS page跑出的一樣
時間Fri Jan 15 12:01:42 2010
我用的是小鼠肌肉 萃取出的蛋白質
我第一次跑western blot 失敗 染1抗時 沒加蓋子乾掉
後來直接用SDS PAGE染色 看看我SDS PAGE有沒有跑成功
結果就很多條band
之後我又再做一次western
transfer 400mA 24V 50min
TBS洗三次 各3分
blocking 1hr 5%脫脂奶
TTBS洗三次 各3分
一抗 anti-b actin mouse IgG 1:1000 用blocking buffer稀釋
anti NFkB mouse IgG 1:1000 ====>我把PVDF切兩片分開染
(可以不要切開兩片染同時染B-actin後洗掉再染NFkB嗎??)
TTBS再洗三次
染二抗 1:5000 goat anti mouse peroxidase 1hr 用PBS稀釋
TBS 洗三次
加呈色劑 ABT peroxidase <<<可以直接呈色不用壓片
一開始20分看 只看到b-actin 的band 很淡
我就讓他繼續呈色 overnight
結果全部的band都跑出來了啦 >"<
長的和我之前SDS page染出來的一樣
我到底哪裡做錯了????????
blocking嗎?? 我們家不是用安佳有差嗎???
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喔耶~每天望著海卻又很忙碌的日子~
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◆ From: 140.121.155.162
1F：推 aggaci:呈色太久了...20分鐘太淡就反應30分鐘麻.直接overnight太 01/15 13:02
2F：→ aggaci:張了吧 01/15 13:02
3F：→ nkj21505:我有20分30分 1hr 1.5hr 都一樣淡阿 01/15 15:43
4F：推 toocool5941:membrane上的抗體可以被洗掉。另外想請問ABT全名? 01/16 03:49