作者nkj21505 (~苹~)
看板Biotech
标题[求救] western 的band和SDS page跑出的一样
时间Fri Jan 15 12:01:42 2010
我用的是小鼠肌肉 萃取出的蛋白质
我第一次跑western blot 失败 染1抗时 没加盖子乾掉
後来直接用SDS PAGE染色 看看我SDS PAGE有没有跑成功
结果就很多条band
之後我又再做一次western
transfer 400mA 24V 50min
TBS洗三次 各3分
blocking 1hr 5%脱脂奶
TTBS洗三次 各3分
一抗 anti-b actin mouse IgG 1:1000 用blocking buffer稀释
anti NFkB mouse IgG 1:1000 ====>我把PVDF切两片分开染
(可以不要切开两片染同时染B-actin後洗掉再染NFkB吗??)
TTBS再洗三次
染二抗 1:5000 goat anti mouse peroxidase 1hr 用PBS稀释
TBS 洗三次
加呈色剂 ABT peroxidase <<<可以直接呈色不用压片
一开始20分看 只看到b-actin 的band 很淡
我就让他继续呈色 overnight
结果全部的band都跑出来了啦 >"<
长的和我之前SDS page染出来的一样
我到底哪里做错了????????
blocking吗?? 我们家不是用安佳有差吗???
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喔耶~每天望着海却又很忙碌的日子~
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◆ From: 140.121.155.162
1F：推 aggaci:呈色太久了...20分钟太淡就反应30分钟麻.直接overnight太 01/15 13:02
2F：→ aggaci:张了吧 01/15 13:02
3F：→ nkj21505:我有20分30分 1hr 1.5hr 都一样淡阿 01/15 15:43
4F：推 toocool5941:membrane上的抗体可以被洗掉。另外想请问ABT全名? 01/16 03:49