作者chenmick (money)
看板Biotech
標題[求救] transform的E.coli長很慢
時間Sat Jan 9 18:51:08 2010
最近準備要做lentivirus
plasmid的vector是從中研院買的pLKO_As2和pLKO_As3w
裡面帶有一段自己cDNA
當transform到DH5a後,plate上的colony長得很慢(跟pLNCX比的話)
而且大小好像不一
之後換成LB養也是長很慢(要放快24小時)
請問這兩個vector本來就會這樣,還是有其他的因素?
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.232
1F：推 williamyang:1.建議用TB養 2.DH5a可能會使vector產生重組 01/09 21:34
2F：→ williamyang:建議使用Stbl3. 01/09 21:34
3F：→ missoul:他有建議用TB 不過我的菌倒是長很兇 我改回LB 01/09 21:54
4F：→ chenmick:那TOP10呢? 而且pLNCX之前養都ok,會是pLNCX較不會重組嗎? 01/09 22:18
5F：推 aceliang:我也覺得sinica這組vector都很low~low~low~~copy 01/09 22:20
6F：→ chenmick:我查到ori是pUC,那不是嗨copy的嗎? 01/09 22:52
7F：推 leoblack:pLKO這套系統,最好TB養30℃,24 hr後挑small colony 01/10 00:41
8F：→ leoblack:比較可以挑到正確的colony~ 01/10 00:41
9F：→ leoblack:寧可長慢點~然後挑到正確的~比較好~根據經驗~長快的挑得 01/10 00:42
10F：→ leoblack:正確率低~會挑到哭出來~ 01/10 00:43
11F：推 liuse:推薦 凍菌 取一點劃plate再挑 保證正確 01/10 10:08
12F：→ chaunen:不好意思, 有人用過invitrogen pLenti4-V5-dest嗎? 01/11 22:51
13F：→ chaunen:有人用DH5a養的嗎? 還是一定得用stbl3 ? 01/11 22:52
14F：推 leoblack:一定要用stb13,他那plasmid有設計過,用一般E. coli會亂切 01/12 16:11
15F：推 chaunen:大驚!!! 只好去尋找stbl3了ˊ,ˋ 謝謝樓上大大! 01/12 19:15
16F：→ chenmick:謝謝以上大大 01/15 19:37