作者chenmick (money)
看板Biotech
标题[求救] transform的E.coli长很慢
时间Sat Jan 9 18:51:08 2010
最近准备要做lentivirus
plasmid的vector是从中研院买的pLKO_As2和pLKO_As3w
里面带有一段自己cDNA
当transform到DH5a後,plate上的colony长得很慢(跟pLNCX比的话)
而且大小好像不一
之後换成LB养也是长很慢(要放快24小时)
请问这两个vector本来就会这样,还是有其他的因素?
谢谢
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◆ From: 163.15.174.232
1F：推 williamyang:1.建议用TB养 2.DH5a可能会使vector产生重组 01/09 21:34
2F：→ williamyang:建议使用Stbl3. 01/09 21:34
3F：→ missoul:他有建议用TB 不过我的菌倒是长很凶 我改回LB 01/09 21:54
4F：→ chenmick:那TOP10呢? 而且pLNCX之前养都ok,会是pLNCX较不会重组吗? 01/09 22:18
5F：推 aceliang:我也觉得sinica这组vector都很low~low~low~~copy 01/09 22:20
6F：→ chenmick:我查到ori是pUC,那不是嗨copy的吗? 01/09 22:52
7F：推 leoblack:pLKO这套系统,最好TB养30℃,24 hr後挑small colony 01/10 00:41
8F：→ leoblack:比较可以挑到正确的colony~ 01/10 00:41
9F：→ leoblack:宁可长慢点~然後挑到正确的~比较好~根据经验~长快的挑得 01/10 00:42
10F：→ leoblack:正确率低~会挑到哭出来~ 01/10 00:43
11F：推 liuse:推荐 冻菌 取一点划plate再挑 保证正确 01/10 10:08
12F：→ chaunen:不好意思, 有人用过invitrogen pLenti4-V5-dest吗? 01/11 22:51
13F：→ chaunen:有人用DH5a养的吗? 还是一定得用stbl3 ? 01/11 22:52
14F：推 leoblack:一定要用stb13,他那plasmid有设计过,用一般E. coli会乱切 01/12 16:11
15F：推 chaunen:大惊!!! 只好去寻找stbl3了ˊ,ˋ 谢谢楼上大大! 01/12 19:15
16F：→ chenmick:谢谢以上大大 01/15 19:37