作者Blibra1002 (man)
看板Biotech
標題[求救] CHIP最後一步PCR的訊號時有時無
時間Sat Jan 9 00:00:28 2010
最近正在進行CHIP實驗 系統已經set up差不多了
能從開始到最後一步PCR能看到有訊號 並且與預估結果相同
所以目前認定應該整個架構是OK的了
但是卻出現非常奇怪的問題
最後萃取出來的DNA拿去PCR之後跑膠
有時實驗結果非常的好 該有的BAND都有P出來
但是在把同一批DNA重新PCR 在拿去跑膠
卻什麼都沒P出來 連本來最明顯的input都是空白一片
本來認為是PCR機器的問題 但是後來拿去別台P也是一樣情況
不知道是不是其他的buffer或者是taq不穩嘛?
實驗室的CHIP protocol大致如下
1.福馬林固定
2.SDS lysis
3.sonication
4.IP O/N
5.Wash
6.65度C elution
7.45度C protease K
8.DNA purify 用 kit column
9.PCR
希望有CHIP高手指教
因為常常P不出來
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.245
1F：推 kyokolove:wash完應該是protease K 後 decrosslink 吧～ 01/11 01:16
2F：→ kyokolove:你可以先用input試PCR的條件 確定有很亮的band 01/11 01:18
3F：推 tigernaxo:CHIP產物PCR不穩定 我以為這是很正常的現象 XD 01/11 06:18
4F：推 tigernaxo:要看你抓什麼東西 之前我做學長的sample 抓TopoII的 01/11 06:21
5F：→ tigernaxo:結果令我想在我臉上寫個慘字 01/11 06:22