作者Blibra1002 (man)
看板Biotech
标题[求救] CHIP最後一步PCR的讯号时有时无
时间Sat Jan 9 00:00:28 2010
最近正在进行CHIP实验 系统已经set up差不多了
能从开始到最後一步PCR能看到有讯号 并且与预估结果相同
所以目前认定应该整个架构是OK的了
但是却出现非常奇怪的问题
最後萃取出来的DNA拿去PCR之後跑胶
有时实验结果非常的好 该有的BAND都有P出来
但是在把同一批DNA重新PCR 在拿去跑胶
却什麽都没P出来 连本来最明显的input都是空白一片
本来认为是PCR机器的问题 但是後来拿去别台P也是一样情况
不知道是不是其他的buffer或者是taq不稳嘛?
实验室的CHIP protocol大致如下
1.福马林固定
2.SDS lysis
3.sonication
4.IP O/N
5.Wash
6.65度C elution
7.45度C protease K
8.DNA purify 用 kit column
9.PCR
希望有CHIP高手指教
因为常常P不出来
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.245
1F：推 kyokolove:wash完应该是protease K 後 decrosslink 吧～ 01/11 01:16
2F：→ kyokolove:你可以先用input试PCR的条件 确定有很亮的band 01/11 01:18
3F：推 tigernaxo:CHIP产物PCR不稳定 我以为这是很正常的现象 XD 01/11 06:18
4F：推 tigernaxo:要看你抓什麽东西 之前我做学长的sample 抓TopoII的 01/11 06:21
5F：→ tigernaxo:结果令我想在我脸上写个惨字 01/11 06:22