作者ngc2997 (紫戀情迷)
看板Biotech
標題[求救] 我的western blot的band都會變成啞鈴狀> <
時間Thu Jan 7 18:58:10 2010
先附上我的western blot圖
http://tw.myblog.yahoo.com/jw!.K4szqWcFxQ4TGqjJRH1pCNO/article?mid=104&prev=-1&next=77
我所使用的是8% SDS-PAGE
膠的配方是Tris-glycine系統from Harlow and Lane(1988)
Stacking以80V跑
Resolving是以100~120V跑
transfer是用AB的semi-dry 6*9一片 50mA 2hr
blocking 3% milk RT 30min~1hr
1抗/3% BSA 1:1000 4度 overnight
2抗/3% milk RT 1hr
TBST 4次 5min
我剛開始做WB時並沒有出現這種情況
但近期的band都會呈現像骨頭一樣
可以請板上有經驗的人指導我一下可能哪個步驟導致這樣的情況呢?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.1.187
1F：推 trumpetlover:我發現我的也會 只是啞鈴沒有那麼大 也是8％的 01/07 19:18
2F：→ mtdas:sample的濃度和體積呢? 01/07 19:53
3F：推 littlelizard:是不是loading完sample才補dye 是的話會這樣 被擠開 01/07 22:35
5F：→ ngc2997:sample的濃度是325ug 體積是65ul dye是10X 01/08 11:34
6F：→ ngc2997:我的dye跟sample一起95~100度 5min 所以沒有再補dye 01/08 11:36
7F：→ ngc2997:因為我一次都跑六片膠所以sample體積大 但是每個well只 01/08 11:40
8F：→ ngc2997:loading sample 10ul 50ug的 01/08 11:41
9F：→ ngc2997:量 (抱歉剛剛打到斷掉) 01/08 11:42
10F：→ ngc2997:bider 謝謝我這次改變一下loading速度 01/08 11:49