作者ngc2997 (紫恋情迷)
看板Biotech
标题[求救] 我的western blot的band都会变成哑铃状> <
时间Thu Jan 7 18:58:10 2010
先附上我的western blot图
http://tw.myblog.yahoo.com/jw!.K4szqWcFxQ4TGqjJRH1pCNO/article?mid=104&prev=-1&next=77
我所使用的是8% SDS-PAGE
胶的配方是Tris-glycine系统from Harlow and Lane(1988)
Stacking以80V跑
Resolving是以100~120V跑
transfer是用AB的semi-dry 6*9一片 50mA 2hr
blocking 3% milk RT 30min~1hr
1抗/3% BSA 1:1000 4度 overnight
2抗/3% milk RT 1hr
TBST 4次 5min
我刚开始做WB时并没有出现这种情况
但近期的band都会呈现像骨头一样
可以请板上有经验的人指导我一下可能哪个步骤导致这样的情况呢?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.1.187
1F：推 trumpetlover:我发现我的也会 只是哑铃没有那麽大 也是8％的 01/07 19:18
2F：→ mtdas:sample的浓度和体积呢? 01/07 19:53
3F：推 littlelizard:是不是loading完sample才补dye 是的话会这样 被挤开 01/07 22:35
5F：→ ngc2997:sample的浓度是325ug 体积是65ul dye是10X 01/08 11:34
6F：→ ngc2997:我的dye跟sample一起95~100度 5min 所以没有再补dye 01/08 11:36
7F：→ ngc2997:因为我一次都跑六片胶所以sample体积大 但是每个well只 01/08 11:40
8F：→ ngc2997:loading sample 10ul 50ug的 01/08 11:41
9F：→ ngc2997:量 (抱歉刚刚打到断掉) 01/08 11:42
10F：→ ngc2997:bider 谢谢我这次改变一下loading速度 01/08 11:49