作者sonix (嘿嘿)
看板Biotech
標題[求救] 雙質體的判斷
時間Tue Jan 5 17:13:44 2010
想請各位幫忙一下判斷質體，
實驗是這樣的...
我把一個6.3 kbp的質體送到原本就含另一個5.9kbp質體的E. coli中，
這兩個質體確定是相容的，
質體抽出來後，以RE切開來看位置，
如果沒搞錯或突變的話，
6.3 kbp (vector A)只會被XbaI和SacI切，5.9 kbp (vector B)只會被EcoRI切，
我只列出我使用的RE，其他可以切的RE我就沒有列了，
transformation後挑了6個colony，都可以生長在含Cm和Ap的LB中，
編號由左至右是1-6，
第三張圖編號則是1,2,4,5,6，左邊是抽質體後直接跑膠，右邊則是SacI切過，
vector A沒有切的話以前有跑過會積在上面，vector B之前則沒有單獨跑過
EcoRI and XbaI digestion
http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4246821059/
EcoRI digestion
http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4247595206/
untreated or SacI digestion
http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4247595278/
DNA ladder 依序是 10,8,6,5,4,3, 2.5, 2, 1.5 kbp
我認為4,5,6是一樣的，於是我保存了no. 1,2,5，
如果把各種組合算進去的話，3個看起來似乎都對又都不對@@"，
想請教一下有經驗的人這該如何判斷，
還需要更進一步的digestion或B單獨跑一次來確認嗎？
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.127.45
1F：推 skybreeze:既然有得到了 需要保留那麼多隻嗎? 01/05 20:51
2F：推 chvkimo:把map找出來 先看看你處理R.E.後 預期的結果~再來比對哪 01/07 11:08
3F：→ chvkimo:一個抽出的plasmid符合 01/07 11:08