作者sonix (嘿嘿)
看板Biotech
标题[求救] 双质体的判断
时间Tue Jan 5 17:13:44 2010
想请各位帮忙一下判断质体，
实验是这样的...
我把一个6.3 kbp的质体送到原本就含另一个5.9kbp质体的E. coli中，
这两个质体确定是相容的，
质体抽出来後，以RE切开来看位置，
如果没搞错或突变的话，
6.3 kbp (vector A)只会被XbaI和SacI切，5.9 kbp (vector B)只会被EcoRI切，
我只列出我使用的RE，其他可以切的RE我就没有列了，
transformation後挑了6个colony，都可以生长在含Cm和Ap的LB中，
编号由左至右是1-6，
第三张图编号则是1,2,4,5,6，左边是抽质体後直接跑胶，右边则是SacI切过，
vector A没有切的话以前有跑过会积在上面，vector B之前则没有单独跑过
EcoRI and XbaI digestion
http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4246821059/
EcoRI digestion
http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4247595206/
untreated or SacI digestion
http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4247595278/
DNA ladder 依序是 10,8,6,5,4,3, 2.5, 2, 1.5 kbp
我认为4,5,6是一样的，於是我保存了no. 1,2,5，
如果把各种组合算进去的话，3个看起来似乎都对又都不对@@"，
想请教一下有经验的人这该如何判断，
还需要更进一步的digestion或B单独跑一次来确认吗？
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.127.45
1F：推 skybreeze:既然有得到了 需要保留那麽多只吗? 01/05 20:51
2F：推 chvkimo:把map找出来 先看看你处理R.E.後 预期的结果~再来比对哪 01/07 11:08
3F：→ chvkimo:一个抽出的plasmid符合 01/07 11:08