作者lynn42595 (琳琳)
看板Biotech
標題[求救] TA clone
時間Tue Dec 29 03:50:20 2009
PCR取得insert並加上primer上設計的切位以後(bamh I)(兩邊都是)
做了TA clone，pcr screen也有東西，但是一直切酵素切不下來，只切了一刀
定序後發現少了一個bamhI切位
之後重做TA順利切下，pcr screen也有預期產物
可是後來跑PCR又跑不出東西
1.為什麼切位會消失~"~
2.後來PCR怎麼都跑不出來
(是在做ligation時，拿TA產物去做positive control都沒有東西)
但是原來質體拿去做Positive就有預期產物
※ 編輯: lynn42595 來自: 220.130.42.235 (12/29 05:05)
1F：推 conective:TA cloning上原本有BamHI的切位嗎？ 12/29 14:51
2F：推 yaliu:primer是for哪裡的？vector上還是insert上？ 12/29 17:54
3F：→ yaliu:如果是vector，我覺得不是很好P耶，如果template是TA產物的 12/29 17:55
4F：→ yaliu:話，當然也是有機會P成功的。 12/29 17:57
5F：→ yaliu:問一下，原來質體是指？？ 12/29 17:59
6F：→ yaliu:至於切位阿～你的每一顆都切不下來嗎？有時後會發生突變現象 12/29 18:00
7F：→ yaliu:可能會有一兩顆切不下來 12/29 18:00
8F：→ wt1seven:TA 一般用EcoRI切吧 分生這東西 想原因通常無3小錄用 12/29 21:10
9F：→ wt1seven:重做吧 或是說你跟分生磁場不合 手氣被 那去拜拜吧! 12/29 21:12
10F：→ lynn42595:ta clone上面本身沒有bamhI切位。primer是for insert 12/29 21:30
11F：→ lynn42595:insert本來在p3x flag上面，就有P下來 12/29 21:31
12F：→ lynn42595:但是ta產物就P不出來，線在已經在重做了...重做好幾次 12/29 21:32
13F：→ lynn42595:每次遇到問題都不一樣 12/29 21:33
14F：→ alaric:primers及 切位 仔細算一下 01/02 16:25