作者lynn42595 (琳琳)
看板Biotech
标题[求救] TA clone
时间Tue Dec 29 03:50:20 2009
PCR取得insert并加上primer上设计的切位以後(bamh I)(两边都是)
做了TA clone，pcr screen也有东西，但是一直切酵素切不下来，只切了一刀
定序後发现少了一个bamhI切位
之後重做TA顺利切下，pcr screen也有预期产物
可是後来跑PCR又跑不出东西
1.为什麽切位会消失~"~
2.後来PCR怎麽都跑不出来
(是在做ligation时，拿TA产物去做positive control都没有东西)
但是原来质体拿去做Positive就有预期产物
※ 编辑: lynn42595 来自: 220.130.42.235 (12/29 05:05)
1F：推 conective:TA cloning上原本有BamHI的切位吗？ 12/29 14:51
2F：推 yaliu:primer是for哪里的？vector上还是insert上？ 12/29 17:54
3F：→ yaliu:如果是vector，我觉得不是很好P耶，如果template是TA产物的 12/29 17:55
4F：→ yaliu:话，当然也是有机会P成功的。 12/29 17:57
5F：→ yaliu:问一下，原来质体是指？？ 12/29 17:59
6F：→ yaliu:至於切位阿～你的每一颗都切不下来吗？有时後会发生突变现象 12/29 18:00
7F：→ yaliu:可能会有一两颗切不下来 12/29 18:00
8F：→ wt1seven:TA 一般用EcoRI切吧 分生这东西 想原因通常无3小录用 12/29 21:10
9F：→ wt1seven:重做吧 或是说你跟分生磁场不合 手气被 那去拜拜吧! 12/29 21:12
10F：→ lynn42595:ta clone上面本身没有bamhI切位。primer是for insert 12/29 21:30
11F：→ lynn42595:insert本来在p3x flag上面，就有P下来 12/29 21:31
12F：→ lynn42595:但是ta产物就P不出来，线在已经在重做了...重做好几次 12/29 21:32
13F：→ lynn42595:每次遇到问题都不一样 12/29 21:33
14F：→ alaric:primers及 切位 仔细算一下 01/02 16:25