作者ko363630 (打雜路人甲)
看板Biotech
標題[求救] competent cell問題
時間Mon Dec 28 19:36:05 2009
請教各位大大
我做competent cell(electroporation)
第一次電的時候,效率極差.10的5次方cfu
但是第二次出來的結果卻整整差了100倍~1000倍
這跟質體稀釋有關嗎?
我做的是BL21(DE3) 的菌
OD直方面測600=0.68(但是看到很多人都用0.3~0.6,實驗室protocol也寫0.6)
最後是以50ml 濃縮成400ul下去分裝
小弟弟一次做competent cell 比較有問題的都是上面幾點,其他都跟實驗室protocol一樣
想請教各位前輩,哪邊需要修改一下.
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.40.85.239
1F：→ wt1seven:實驗室方法也是參考用 做實驗還是自己看分生實驗的聖經 12/28 20:32
2F：→ wt1seven:實驗室人來來去去的 那方法阿哉被亂改過了沒 參考聖經 12/28 20:35
3F：推 hchs890843:我們lab是調成0.45~0.5之間~~電的細胞要洗glycerol 12/29 16:03
4F：→ hchs890843:那個洗的過程一定要讓它冰涼暢快XD 12/29 16:03
5F：推 vncss:全程冰上比較好 01/01 15:41