作者ko363630 (打杂路人甲)
看板Biotech
标题[求救] competent cell问题
时间Mon Dec 28 19:36:05 2009
请教各位大大
我做competent cell(electroporation)
第一次电的时候,效率极差.10的5次方cfu
但是第二次出来的结果却整整差了100倍~1000倍
这跟质体稀释有关吗?
我做的是BL21(DE3) 的菌
OD直方面测600=0.68(但是看到很多人都用0.3~0.6,实验室protocol也写0.6)
最後是以50ml 浓缩成400ul下去分装
小弟弟一次做competent cell 比较有问题的都是上面几点,其他都跟实验室protocol一样
想请教各位前辈,哪边需要修改一下.
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.40.85.239
1F：→ wt1seven:实验室方法也是参考用 做实验还是自己看分生实验的圣经 12/28 20:32
2F：→ wt1seven:实验室人来来去去的 那方法阿哉被乱改过了没 参考圣经 12/28 20:35
3F：推 hchs890843:我们lab是调成0.45~0.5之间~~电的细胞要洗glycerol 12/29 16:03
4F：→ hchs890843:那个洗的过程一定要让它冰凉畅快XD 12/29 16:03
5F：推 vncss:全程冰上比较好 01/01 15:41