作者juwoo (redeye)
看板Biotech
標題[求救] 送大的植體進DH5啊法~
時間Mon Dec 28 15:54:14 2009
受學長姐之命要送個16Kb的plasmid進DH5a
但是不論用電的用燙的(heat shock)都沒辦法把他老大請到菌裡...
也不知道是不是Ligation的問題= =
接的方法是7K+9K一平一鈍的方法黏接
請問板上的各位高手有甚麼好的意見
謝謝
(__)
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.213.184
1F：→ conective:反應條件寫一下 還有你錯字好多... 12/28 16:16
2F：推 ranilla:絕對是ligation的問題，我目前23k用heat shock就可以了 12/28 17:44
3F：→ turtle24:說不定是菌的問題 其他人送質體ok嗎 12/28 18:32
4F：推 ookubo:一是沒接上（確認過嗎？）再來就是competent cell沒效了~ 12/28 18:34
5F：→ juwoo:其他人送都ok~ligation後沒確認...有確認的好方法嗎@@? 12/29 10:46
6F：→ juwoo:competent cell ok我有測試其他的plasmid 12/29 10:47
7F：→ juwoo:抱歉(__)我會加強國文的~條件: Ligation T4 ligase O/N 12/29 10:49
8F：→ juwoo:現在再嘗試4度 2天~之前是一天16度 12/29 10:50
9F：→ juwoo:Heat shock 42度90秒~冰2~5分後加LB培養2小時 12/29 10:51
10F：→ juwoo:電菌也是電菌後用LB培養2小時後再塗盤 12/29 10:52
11F：推 yaliu:感覺是ligation問題～一平一鈍是什麼意思阿？blunt end? 12/29 18:05
12F：→ taxol:一端blunt 一端sticky 12/29 21:21
13F：推 conective:ligation vector 跟 insert的比例呢？ 12/30 13:18
14F：推 tjbulls:competent cell的frequency 有測過嗎? 01/01 15:25