作者juwoo (redeye)
看板Biotech
标题[求救] 送大的植体进DH5啊法~
时间Mon Dec 28 15:54:14 2009
受学长姐之命要送个16Kb的plasmid进DH5a
但是不论用电的用烫的(heat shock)都没办法把他老大请到菌里...
也不知道是不是Ligation的问题= =
接的方法是7K+9K一平一钝的方法黏接
请问板上的各位高手有甚麽好的意见
谢谢
(__)
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.213.184
1F：→ conective:反应条件写一下 还有你错字好多... 12/28 16:16
2F：推 ranilla:绝对是ligation的问题，我目前23k用heat shock就可以了 12/28 17:44
3F：→ turtle24:说不定是菌的问题 其他人送质体ok吗 12/28 18:32
4F：推 ookubo:一是没接上（确认过吗？）再来就是competent cell没效了~ 12/28 18:34
5F：→ juwoo:其他人送都ok~ligation後没确认...有确认的好方法吗@@? 12/29 10:46
6F：→ juwoo:competent cell ok我有测试其他的plasmid 12/29 10:47
7F：→ juwoo:抱歉(__)我会加强国文的~条件: Ligation T4 ligase O/N 12/29 10:49
8F：→ juwoo:现在再尝试4度 2天~之前是一天16度 12/29 10:50
9F：→ juwoo:Heat shock 42度90秒~冰2~5分後加LB培养2小时 12/29 10:51
10F：→ juwoo:电菌也是电菌後用LB培养2小时後再涂盘 12/29 10:52
11F：推 yaliu:感觉是ligation问题～一平一钝是什麽意思阿？blunt end? 12/29 18:05
12F：→ taxol:一端blunt 一端sticky 12/29 21:21
13F：推 conective:ligation vector 跟 insert的比例呢？ 12/30 13:18
14F：推 tjbulls:competent cell的frequency 有测过吗? 01/01 15:25