作者Pulyruby (puly)
看板Biotech
標題[求救] 黏合兩段互補DNA的問題
時間Thu Dec 24 17:18:01 2009
廠商建議我配置緩衝液溶解DNA
配方如下
10mM Tris, pH 7.5-8.0,
50mM NaCl,
1mM EDTA
溶解後在95℃加熱2分鐘，隨後慢慢冷卻至室溫
請問有經驗的人通常作法是如何?
是先加去離子水配置好後再拿去滅菌或直接用0.22μm膜過濾?
在95℃加熱2分鐘就可以了嗎？
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.104.12
1F：推 tsubasawolfy:1.滅菌 2.PCR機器允許的話可以設慢慢自動降溫 12/24 17:41
2F：→ tsubasawolfy:95降到室溫大概設40分吧 12/24 17:42
3F：推 TOTO:I use ligation buffer instead, it's easier 12/25 03:08
4F：推 chvkimo:所以加熱2分鐘 是要滅菌嗎? 12/25 14:46
5F：→ Pulyruby:謝謝你的解答 12/26 10:50
6F：推 logphase:用水浴槽加熱至95度，關掉後慢慢冷卻至室溫，PCR太奢侈了 12/30 16:05
7F：→ logphase:DNA用的溶液一定要高溫高壓，目的是去除DNase 12/30 16:06