作者Pulyruby (puly)
看板Biotech
标题[求救] 黏合两段互补DNA的问题
时间Thu Dec 24 17:18:01 2009
厂商建议我配置缓冲液溶解DNA
配方如下
10mM Tris, pH 7.5-8.0,
50mM NaCl,
1mM EDTA
溶解後在95℃加热2分钟，随後慢慢冷却至室温
请问有经验的人通常作法是如何?
是先加去离子水配置好後再拿去灭菌或直接用0.22μm膜过滤?
在95℃加热2分钟就可以了吗？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.104.12
1F：推 tsubasawolfy:1.灭菌 2.PCR机器允许的话可以设慢慢自动降温 12/24 17:41
2F：→ tsubasawolfy:95降到室温大概设40分吧 12/24 17:42
3F：推 TOTO:I use ligation buffer instead, it's easier 12/25 03:08
4F：推 chvkimo:所以加热2分钟 是要灭菌吗? 12/25 14:46
5F：→ Pulyruby:谢谢你的解答 12/26 10:50
6F：推 logphase:用水浴槽加热至95度，关掉後慢慢冷却至室温，PCR太奢侈了 12/30 16:05
7F：→ logphase:DNA用的溶液一定要高温高压，目的是去除DNase 12/30 16:06