作者soceress (贏了世界又如何)
看板Biotech
標題Re: [求救] Western Blot出來的band不清楚
時間Thu Dec 24 09:48:51 2009
非常謝謝您的回文~~~~~
※ 引述《boblu (六百)》之銘言:
: 我很好奇 那些白點你怎麼這麼確定不是 transfer 有泡
: 以前沒有現在有 但是你各試過幾次呢? 會不會是剛好沒夾好?
因為這張圖片是strip後再上的抗體,第一次是水痕嚴重但無白點
所以不是transfer造成的喔
還有一個問題是...以前有做出過水痕嚴重的結果,同時併有白點
不知白點和水痕之間會不會有關聯性呢??
: 所謂水痕可能性很多
: avtivate 不均勻, transfer 不均勻, block 不均勻都有可能
以上我都check過說....
同張membrane我剪成三塊分別接不同的抗體
就這個蛋白的抗體會這樣.....
我最擔心的是您的最後一句:它本來就可能長這樣 T_T
: 另外處理 membrane 的過程裡面有沒有不小心沾染油脂?
: 整個過程中使用的buffer 有沒有長什麼怪東西?
buffer很乾淨,新配好的
沒有沾到油脂 (但還是記下來!)
: band 模糊
: 另外 我注意到你的結果,
: target protein 下面還有一條 band(是intenal control嗎?)很漂亮
: 所以估計不是 PAGE run 不好的問題
: 一個可能是膠片的濃度不適當
很遺憾那條不是target之一
膠片的濃度不對是指在這個區域的膠片濃度不均,
還是要換別的濃度呢??
: 另一個可能則是你的 target protein 真的就是這樣......
: 訊號弱
: 版友建議的增加loading, 增加抗體同度,改變反應溫度與時間都可以試試看
: 不過也要考慮 "你要染的這個 protein 真的就是這樣" 這種可能性
嗯.......我今天要來努力了!!!!!!
先從增加loading開始好了
非常謝謝您!
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◆ From: 192.192.93.160
1F:推 mtdas:可能是stripping buffer太強或作用太久 12/24 14:43
2F:推 jbopen:有沒有可能是你奶粉沒溶解,沉澱會變白點,我有遇過 12/24 20:36
3F:推 icome:別的抗體都正常的話 可能抗體本身品質就是這樣 12/24 20:44
4F:→ soceress:感謝各位的幫忙!!!!! 12/25 09:57