作者soceress (赢了世界又如何)
看板Biotech
标题Re: [求救] Western Blot出来的band不清楚
时间Thu Dec 24 09:48:51 2009
非常谢谢您的回文~~~~~
※ 引述《boblu (六百)》之铭言:
: 我很好奇 那些白点你怎麽这麽确定不是 transfer 有泡
: 以前没有现在有 但是你各试过几次呢? 会不会是刚好没夹好?
因为这张图片是strip後再上的抗体,第一次是水痕严重但无白点
所以不是transfer造成的喔
还有一个问题是...以前有做出过水痕严重的结果,同时并有白点
不知白点和水痕之间会不会有关联性呢??
: 所谓水痕可能性很多
: avtivate 不均匀, transfer 不均匀, block 不均匀都有可能
以上我都check过说....
同张membrane我剪成三块分别接不同的抗体
就这个蛋白的抗体会这样.....
我最担心的是您的最後一句:它本来就可能长这样 T_T
: 另外处理 membrane 的过程里面有没有不小心沾染油脂?
: 整个过程中使用的buffer 有没有长什麽怪东西?
buffer很乾净,新配好的
没有沾到油脂 (但还是记下来!)
: band 模糊
: 另外 我注意到你的结果,
: target protein 下面还有一条 band(是intenal control吗?)很漂亮
: 所以估计不是 PAGE run 不好的问题
: 一个可能是胶片的浓度不适当
很遗憾那条不是target之一
胶片的浓度不对是指在这个区域的胶片浓度不均,
还是要换别的浓度呢??
: 另一个可能则是你的 target protein 真的就是这样......
: 讯号弱
: 版友建议的增加loading, 增加抗体同度,改变反应温度与时间都可以试试看
: 不过也要考虑 "你要染的这个 protein 真的就是这样" 这种可能性
嗯.......我今天要来努力了!!!!!!
先从增加loading开始好了
非常谢谢您!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.93.160
1F:推 mtdas:可能是stripping buffer太强或作用太久 12/24 14:43
2F:推 jbopen:有没有可能是你奶粉没溶解,沉淀会变白点,我有遇过 12/24 20:36
3F:推 icome:别的抗体都正常的话 可能抗体本身品质就是这样 12/24 20:44
4F:→ soceress:感谢各位的帮忙!!!!! 12/25 09:57