作者iris416 (Mei-Mei)
看板Biotech
標題[求救] PCR的問題???
時間Wed Dec 23 18:38:26 2009
最近在PCR鬼打牆的狀態 Orz
覺得PCR真的是很tricky的一個東西> <"
在測試狀態以及P第一批10隻檢體的時候都還滿ok的
沒有雜band只有一排整齊的dimer出現(這是預期的結果)
但是我接下來要做下一批的時候, 明明就是同樣的條件跟同一對primer
但不是怎麼P都有很多條雜band, 就是一點東西都P不出來...
已經做了兩次的結果都這樣
懷疑是不是污染也加上了negative control,確定了沒有其他東西污染
明天要討論一下是不是要換一對primer...
可是還是覺得很奇怪,為什麼同樣的條件跟primer會跑出不一樣的結果阿
我是不是該去拜拜了.........> <
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.150
1F：推 ucla0326:我P過ㄧ個月，空空如也，老闆說休息幾天，還真的有東西了 12/23 18:42
2F：→ iris416:對!!有時候超奇怪的~ 隨意做反而有東西~真正小心的時候 12/23 18:45
3F：→ iris416:卻空空如也!! 或許這幾天我心情都滿緊繃的吧 12/23 18:46
4F：→ turtle24:P成功的東西留一點當positive? 12/23 19:09
5F：→ turtle24:我是指檢體不是P出的產物 12/23 19:09
6F：→ iris416:有~我有把第一次P出來的檢體再拿出來當PTC 一起P一次~ 12/23 19:16
7F：→ iris416:結果跟第一次結果不一樣,出現了很多雜band,不知為什麼 12/23 19:16
8F：推 pytforyou:PCR 這種東西，感覺就是運氣運氣，去拜拜一下吧！加油～ 12/23 20:18
9F：→ iris416:恩,不過也想知道是哪邊出了問題, 這個實在是很神奇 12/23 20:21
10F：推 pytforyou:手氣出了問題吧？(逃...) 12/23 20:23
11F：→ iris416:恩~我想去拜拜XDD 然後再討論該怎麼修改實驗的條件... 12/23 21:11
12F：→ zarate:要檢查的東西太多 當碰運氣吧 12/23 22:34
13F：推 aeroufo:把anealing time改短一點，溫度也降一點試試看 12/24 13:54
14F：推 wensing:我通常是砍掉重練 (認真中) 12/24 14:25
15F：推 jademan:同意樓上...試劑都換掉吧!重作比較快 12/24 17:44
16F：→ iris416:恩...我會換一批...休息個一天再重新出發!!被PCR弄到很煩 12/24 17:53
17F：→ iris416:可是a大,降低溫度的話不是會出現更多的雜band嗎?? 12/24 18:02
18F：→ iris416:我的預期結果只有primer dimer出現最好不要有任何的雜band 12/24 18:03
19F：推 nexusfantasy:跑個gradient看看吧 12/24 19:08
20F：→ iceking:可能是primer已經degrade了! 12/25 11:27
21F：推 icome:這種情況真的很煩 到最後會開始懷疑是不是PCR機器有問題 12/25 11:44
22F：→ iris416:謝謝大家的回答~~討論的結果是可能要重新設primer了 12/25 16:19
23F：推 reiosea:我也是耶，做一整個月都重現不出來，明明上個月才做過 12/30 14:05
24F：推 bloodgas:有可能機器壞掉了～升降溫不正確結果就會怪 01/05 00:56
25F：推 reiosea:我後來做出來了 把templete DNA 降到0.3ug(genomic DNA) 01/05 12:05
26F：→ iris416:很奇怪阿 有時候條件都一樣但都無法重現 條件都要重設 01/06 16:38