作者iris416 (Mei-Mei)
看板Biotech
标题[求救] PCR的问题???
时间Wed Dec 23 18:38:26 2009
最近在PCR鬼打墙的状态 Orz
觉得PCR真的是很tricky的一个东西> <"
在测试状态以及P第一批10只检体的时候都还满ok的
没有杂band只有一排整齐的dimer出现(这是预期的结果)
但是我接下来要做下一批的时候, 明明就是同样的条件跟同一对primer
但不是怎麽P都有很多条杂band, 就是一点东西都P不出来...
已经做了两次的结果都这样
怀疑是不是污染也加上了negative control,确定了没有其他东西污染
明天要讨论一下是不是要换一对primer...
可是还是觉得很奇怪,为什麽同样的条件跟primer会跑出不一样的结果阿
我是不是该去拜拜了.........> <
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.150
1F：推 ucla0326:我P过ㄧ个月，空空如也，老板说休息几天，还真的有东西了 12/23 18:42
2F：→ iris416:对!!有时候超奇怪的~ 随意做反而有东西~真正小心的时候 12/23 18:45
3F：→ iris416:却空空如也!! 或许这几天我心情都满紧绷的吧 12/23 18:46
4F：→ turtle24:P成功的东西留一点当positive? 12/23 19:09
5F：→ turtle24:我是指检体不是P出的产物 12/23 19:09
6F：→ iris416:有~我有把第一次P出来的检体再拿出来当PTC 一起P一次~ 12/23 19:16
7F：→ iris416:结果跟第一次结果不一样,出现了很多杂band,不知为什麽 12/23 19:16
8F：推 pytforyou:PCR 这种东西，感觉就是运气运气，去拜拜一下吧！加油～ 12/23 20:18
9F：→ iris416:恩,不过也想知道是哪边出了问题, 这个实在是很神奇 12/23 20:21
10F：推 pytforyou:手气出了问题吧？(逃...) 12/23 20:23
11F：→ iris416:恩~我想去拜拜XDD 然後再讨论该怎麽修改实验的条件... 12/23 21:11
12F：→ zarate:要检查的东西太多 当碰运气吧 12/23 22:34
13F：推 aeroufo:把anealing time改短一点，温度也降一点试试看 12/24 13:54
14F：推 wensing:我通常是砍掉重练 (认真中) 12/24 14:25
15F：推 jademan:同意楼上...试剂都换掉吧!重作比较快 12/24 17:44
16F：→ iris416:恩...我会换一批...休息个一天再重新出发!!被PCR弄到很烦 12/24 17:53
17F：→ iris416:可是a大,降低温度的话不是会出现更多的杂band吗?? 12/24 18:02
18F：→ iris416:我的预期结果只有primer dimer出现最好不要有任何的杂band 12/24 18:03
19F：推 nexusfantasy:跑个gradient看看吧 12/24 19:08
20F：→ iceking:可能是primer已经degrade了! 12/25 11:27
21F：推 icome:这种情况真的很烦 到最後会开始怀疑是不是PCR机器有问题 12/25 11:44
22F：→ iris416:谢谢大家的回答~~讨论的结果是可能要重新设primer了 12/25 16:19
23F：推 reiosea:我也是耶，做一整个月都重现不出来，明明上个月才做过 12/30 14:05
24F：推 bloodgas:有可能机器坏掉了～升降温不正确结果就会怪 01/05 00:56
25F：推 reiosea:我後来做出来了 把templete DNA 降到0.3ug(genomic DNA) 01/05 12:05
26F：→ iris416:很奇怪阿 有时候条件都一样但都无法重现 条件都要重设 01/06 16:38