作者bradchu (smith讚)
看板Biotech
標題[求救] 有關zymography
時間Sun Nov 29 00:44:02 2009
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
請問板上有強者做過這實驗嗎?
基本上之前討論串我已看過但找不到解答
我之前做過很多次但都失敗
最近一次拿FBS當POSTIVE
結果還是失敗
之前看到有人說跑ZYMOGRAPHY的BUFFER最好新鮮配置?
這對結果有影響嗎?
GELATIN使用前先在水域槽37度加熱至溶解
跑完的膠用1X renaturing buffer(Triton X-100)搖晃30min
然後1x developing buffer放37度oven兩天
這樣的流程沒錯吧?
實在卡關卡很大
請強者給我意見
謝謝
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◆ From: 61.229.178.163
※ 編輯: bradchu 來自: 61.229.178.163 (11/29 00:45)
1F：→ st92013:把步驟跟配方詳細寫出來吧 不然大家也不知道你問題出在哪 11/29 01:07
2F：推 chinolocal:overnight即可，1x developing buffer"一定要現配"， 11/29 19:59
3F：→ chinolocal:還有"記得調整pH值"，沒有調pH怎麼做都是失敗的 11/29 20:00
4F：→ bradchu:我真的沒有調...請問要調至多少?? 11/29 22:29
5F：推 st92013:development buffer不用現配八 我們家都配一罐 放室溫 11/30 00:22
6F：→ st92013:都可以跑出來 11/30 00:22
7F：推 a001ou:請問FBS當正對照組是正確的嗎? 這實驗要保持酵素活性 我們 11/30 12:54
8F：→ a001ou:lab在收sample的時候都非常的小心 深怕失去活性 11/30 12:55
9F：→ a001ou:阿阿 對不起 我把他看成BSA了 抱歉抱歉 11/30 12:55
10F：→ shaulang:你平常酵素是甚麼樣的pH值、溫度和大概滲透壓，去反應 11/30 21:44
11F：→ shaulang:就得要怎樣的環境將蛋白質變回來原來的結構 11/30 21:45