作者bradchu (smith赞)
看板Biotech
标题[求救] 有关zymography
时间Sun Nov 29 00:44:02 2009
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
请问板上有强者做过这实验吗?
基本上之前讨论串我已看过但找不到解答
我之前做过很多次但都失败
最近一次拿FBS当POSTIVE
结果还是失败
之前看到有人说跑ZYMOGRAPHY的BUFFER最好新鲜配置?
这对结果有影响吗?
GELATIN使用前先在水域槽37度加热至溶解
跑完的胶用1X renaturing buffer(Triton X-100)摇晃30min
然後1x developing buffer放37度oven两天
这样的流程没错吧?
实在卡关卡很大
请强者给我意见
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.229.178.163
※ 编辑: bradchu 来自: 61.229.178.163 (11/29 00:45)
1F：→ st92013:把步骤跟配方详细写出来吧 不然大家也不知道你问题出在哪 11/29 01:07
2F：推 chinolocal:overnight即可，1x developing buffer"一定要现配"， 11/29 19:59
3F：→ chinolocal:还有"记得调整pH值"，没有调pH怎麽做都是失败的 11/29 20:00
4F：→ bradchu:我真的没有调...请问要调至多少?? 11/29 22:29
5F：推 st92013:development buffer不用现配八 我们家都配一罐 放室温 11/30 00:22
6F：→ st92013:都可以跑出来 11/30 00:22
7F：推 a001ou:请问FBS当正对照组是正确的吗? 这实验要保持酵素活性 我们 11/30 12:54
8F：→ a001ou:lab在收sample的时候都非常的小心 深怕失去活性 11/30 12:55
9F：→ a001ou:阿阿 对不起 我把他看成BSA了 抱歉抱歉 11/30 12:55
10F：→ shaulang:你平常酵素是甚麽样的pH值、温度和大概渗透压，去反应 11/30 21:44
11F：→ shaulang:就得要怎样的环境将蛋白质变回来原来的结构 11/30 21:45