作者yosheming (^^)
看板Biotech
標題[求救] 關於transfect後細胞冷光表現
時間Mon Nov 23 00:47:58 2009
用的transfect方法是DEAE-dextran
類似CaCl2或lipofetamine 2000
目前用A549做實驗...=.= 有聽說這株細胞不好送...
用的plasmid DNA 會在transfect前treat 不同dose的 UV 引起DNA damage
(此部分treat UV 後有跑gel，確認損傷程度未造成DNA嚴重斷裂)
之後再將treat 不同UV dose的 plasmid DNA transfect 到細胞~
進入細胞內讓細胞的DNA修復機制進行修補~
而後測冷光值觀察期修復情況!!
實驗步驟大概是這樣~
seeding 6hrs
--> starvation16-24hr
--> transfect 15-30min
--> treat chloroquine(增加transfection effective)
--> 換新的medium，maintain 24hr
--> 測冷光表現
原先預期的結果:
使用不同UV dose~可能結果:
1.隨暴露UV劑量增加，冷光表現下降!! ==> X
2.雖然暴露劑量增加，但最終損傷都被修復，會呈現相似的冷光表現 ==> X
現在的結果:
原本完全沒有暴露UV的這個組別~(其他組dose是 200 400 600 800)
理論上比起其他組別應該要有最高的冷光值表現!!
但是~測出來的冷光值表現結果
400>600>800>200>0
目前正在測試不同DNA濃度的影響~
但出來的結果雖然不同濃度會有影響~
但是數值還是沒有比目前最高的 dose 400 高!!
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說了這一堆...
想請問版上的朋友對這類實驗是否有遇過類似問題??
或是對實驗內容或結果有什麼想法可以提供我參考!!
希望會有些靈感發現問題的癥結...>"<...謝謝!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 122.121.177.215
1F：推 aceliang:有對細胞數做normalization嗎？ 11/23 18:53
2F：推 ranilla:依結果討論，DNA repair system促進螢光的表現 11/23 20:07
3F：→ ranilla:你可以試著大量表現UV damage related repair protein 11/23 20:09
4F：→ ranilla:看看是否有相似結果，如果你絕對相信你的結果的話 11/23 20:09
5F：→ yosheming:這個實驗是follow paper的方法做的~但細胞株不同!! 11/23 23:16
6F：→ yosheming:他們是用初代培養的細胞...>"<...淋巴細胞~ 11/23 23:17
7F：→ yosheming:冷光值表現是0>200>400>600>800 11/23 23:17
8F：→ yosheming:關於細胞數部份~種細胞的時候是隨機選位子種!! 11/23 23:18
9F：→ yosheming:所以每個96well隨機seeding~加組別也試過不同順序!! 11/23 23:19
10F：→ yosheming:但做到目前為止劑量0那組依舊很低...ORZ 11/23 23:19
11F：→ yosheming:隨然問題還在...不過還是謝謝樓上兩位的意見^^ 11/23 23:20