作者yosheming (^^)
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标题[求救] 关於transfect後细胞冷光表现
时间Mon Nov 23 00:47:58 2009
用的transfect方法是DEAE-dextran
类似CaCl2或lipofetamine 2000
目前用A549做实验...=.= 有听说这株细胞不好送...
用的plasmid DNA 会在transfect前treat 不同dose的 UV 引起DNA damage
(此部分treat UV 後有跑gel，确认损伤程度未造成DNA严重断裂)
之後再将treat 不同UV dose的 plasmid DNA transfect 到细胞~
进入细胞内让细胞的DNA修复机制进行修补~
而後测冷光值观察期修复情况!!
实验步骤大概是这样~
seeding 6hrs
--> starvation16-24hr
--> transfect 15-30min
--> treat chloroquine(增加transfection effective)
--> 换新的medium，maintain 24hr
--> 测冷光表现
原先预期的结果:
使用不同UV dose~可能结果:
1.随暴露UV剂量增加，冷光表现下降!! ==> X
2.虽然暴露剂量增加，但最终损伤都被修复，会呈现相似的冷光表现 ==> X
现在的结果:
原本完全没有暴露UV的这个组别~(其他组dose是 200 400 600 800)
理论上比起其他组别应该要有最高的冷光值表现!!
但是~测出来的冷光值表现结果
400>600>800>200>0
目前正在测试不同DNA浓度的影响~
但出来的结果虽然不同浓度会有影响~
但是数值还是没有比目前最高的 dose 400 高!!
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说了这一堆...
想请问版上的朋友对这类实验是否有遇过类似问题??
或是对实验内容或结果有什麽想法可以提供我参考!!
希望会有些灵感发现问题的症结...>"<...谢谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.121.177.215
1F：推 aceliang:有对细胞数做normalization吗？ 11/23 18:53
2F：推 ranilla:依结果讨论，DNA repair system促进萤光的表现 11/23 20:07
3F：→ ranilla:你可以试着大量表现UV damage related repair protein 11/23 20:09
4F：→ ranilla:看看是否有相似结果，如果你绝对相信你的结果的话 11/23 20:09
5F：→ yosheming:这个实验是follow paper的方法做的~但细胞株不同!! 11/23 23:16
6F：→ yosheming:他们是用初代培养的细胞...>"<...淋巴细胞~ 11/23 23:17
7F：→ yosheming:冷光值表现是0>200>400>600>800 11/23 23:17
8F：→ yosheming:关於细胞数部份~种细胞的时候是随机选位子种!! 11/23 23:18
9F：→ yosheming:所以每个96well随机seeding~加组别也试过不同顺序!! 11/23 23:19
10F：→ yosheming:但做到目前为止剂量0那组依旧很低...ORZ 11/23 23:19
11F：→ yosheming:随然问题还在...不过还是谢谢楼上两位的意见^^ 11/23 23:20