作者gary1031 (王楚)
看板Biotech
標題[求救] 關於C41(DE3) C43(DE3) 的transform
時間Tue Nov 17 19:54:44 2009
最近由於實驗的需要 需要用到C41(DE3) 和C43(DE3)這兩種competent cell
需要同時transform兩個plasmid進到competent cell中
兩個plasmid分別帶有Amp和Kan resistant gene
之前co-transfoem到DH5a 和 BL21(DE3)中都非常順利
在含有Amp和Kan的plate上都長滿滿一盤
可是在C41和C43 competent cell卻發生問題
怎樣transform都沒有長出任何一顆colony
放冰上30 min
heat shock完再用沒有抗生素的recovery medium養一小時再塗也是沒用
做的很灰心 完全不知道為什麼....
不知道是否有人有遇過類似的情況 或是能夠提供小弟我一些建議
謝謝大家了~^^
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.168.32.194
1F：→ turtle24:competent cell直接加medium會不會長 11/17 20:48
2F：→ milkpa:C41/C43的competence比DH5α差，除了DNA稍多一點，這種co- 11/17 21:32
3F：→ gary1031:之前有測試過 會~ 11/17 21:32
4F：→ milkpa:transformation的抗生素用量請減半，塞三個就用1/3，類推 11/17 21:33
5F：→ milkpa:過去的經驗是兩個質體還能有幾十個，三個一起丟多半只有個 11/17 21:33
6F：→ milkpa:位數，還不見得是真的（攤手），不趕就一個一個放囉 11/17 21:34