作者gary1031 (王楚)
看板Biotech
标题[求救] 关於C41(DE3) C43(DE3) 的transform
时间Tue Nov 17 19:54:44 2009
最近由於实验的需要 需要用到C41(DE3) 和C43(DE3)这两种competent cell
需要同时transform两个plasmid进到competent cell中
两个plasmid分别带有Amp和Kan resistant gene
之前co-transfoem到DH5a 和 BL21(DE3)中都非常顺利
在含有Amp和Kan的plate上都长满满一盘
可是在C41和C43 competent cell却发生问题
怎样transform都没有长出任何一颗colony
放冰上30 min
heat shock完再用没有抗生素的recovery medium养一小时再涂也是没用
做的很灰心 完全不知道为什麽....
不知道是否有人有遇过类似的情况 或是能够提供小弟我一些建议
谢谢大家了~^^
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.168.32.194
1F：→ turtle24:competent cell直接加medium会不会长 11/17 20:48
2F：→ milkpa:C41/C43的competence比DH5α差，除了DNA稍多一点，这种co- 11/17 21:32
3F：→ gary1031:之前有测试过 会~ 11/17 21:32
4F：→ milkpa:transformation的抗生素用量请减半，塞三个就用1/3，类推 11/17 21:33
5F：→ milkpa:过去的经验是两个质体还能有几十个，三个一起丢多半只有个 11/17 21:33
6F：→ milkpa:位数，还不见得是真的（摊手），不赶就一个一个放罗 11/17 21:34