作者arzakiii (Duke. Bio)
看板Biotech
標題[求救] 請問一下抽Gram positive細菌genomic DNA的方法
時間Sun Nov 15 18:53:04 2009
各位好
我實驗室主要操作的菌株是以放線菌中的Streptomyces為主
現在實驗室主要抽取的方式是以CTAB法為主
第一個問題是
我們在破菌的時候使用液態氮研磨的方式
會造成genomic DNA的斷裂
雖然不會全部斷掉
但是會影響到我們之後使用RE的判斷
之前我們學長姐有試過
不用液態氮研磨，只用化學藥劑的方式破菌
將菌體加入lysis buffer (Tris、10% SDS、EDTA、2% Triton-X100)
額外加lysozyme 37度 反應半小時
但是不用液態氮
破菌的效果真的是太差了
第二個問題
我們使用CTAB抽取出來的genomic DNA在跑膠的時候
會看到agarose gel有拖尾的現象
會從loading well裡面也會被染到
老師是說DNA太髒
但是我們都過幾次PCI還是一樣很髒
不過我用RE切完以後 就不會有脫尾現象
想問一下有沒有方法可以改善的??
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◆ From: 140.136.180.113
1F：推 vita895:破菌時間可以久一點吧~ 11/15 20:13
2F：→ ROKEE:做Southern嗎? 那跑膠時DNA濃度低一點吧 11/15 20:55
老師希望SOUTHERN的DNA濃度要很濃會比較好 = =
3F：推 kemp6611:去買抽total DNA的kit來抽ㄚ....非常快速!! 11/15 23:29
老師非常討厭用kit她覺得kit很貴 不划算，用傳統法最好 Orz...
※ 編輯: arzakiii 來自: 140.136.180.113 (11/16 16:11)
4F：推 rivor:用水煮啊,..我以前用微波耶.. 11/16 18:07