※ 引述《anchi (我家有隻可愛小都)》之銘言： : 請問,使用lipofectamine做transfection : 和用virus infection, 結果有何不同呢? : 以下是我對此二方法的想法:(可能有很多錯誤請大家幫我指正) : 假設我要將一個基因送入細胞株讓他表現. : 一般可選擇可在真核細胞表現的vector(ex:pcDNA3)或 : virus vector(ex:retrovirus vector)來攜帶此基因. : 假設用pcDNA3攜帶此基因,再用lipofectamine送入細胞, : 經過抗生素篩選一段時間,可得stable cell line. : 如此可將此珠細胞冷凍保存,每次實驗需要再取出培養. : 假設用virus vector攜帶此基因,則需先送入packaging cell, : 製造virus, 再去infection 目標cell. : 而被感染的細胞雖然會表現此基因,但細胞被病毒感染不久後也會死亡. : 似乎無法穩定保存. retrovirus 有個特性你忘記囉 去查查看 這樣你就會知道用virus infection的方式是可以穩定保存的 且花費的時間比用一般vector送進去挑stable clone來的短 所以不用再從package開始 : 每次需要此細胞時須從vector送入packaging cell步驟開始... : (好像沒看過直接用lipofectamine直接把virus plasmid送進目標細胞株,why?) : 這樣看起來好像使用一般真核細胞表現vector的方法比較簡單也比較能保存. : 但是virus infection卻也是實驗是很普遍的方法. : 請問大家這兩種方法transfection的結果差異或優缺點在哪裡呢? episome: 簡單快速方便，一般P1 lab就可操作。缺點是不同cell line transfection efficiency 會有很大差異，像一些難搞的cell line (ex:HepG2)就算用萬惡的(價格上) lipofectamine2000 效率也不大好 virus infection: 需要P2 lab才能操作(除非你偷做)，優點就是efficiency極好(MOI可以控制)，個人 推薦XD，至於你問的why那個問題，你去翻翻拿來做virus的plasmid裡面的map就知道 原因 歡迎大家分享心得和補完 : 不好意思若我有些觀念錯誤請大家幫忙指正,謝謝! : :) : ※ 編輯: anchi 來自: 125.231.224.69 (11/13 20:00) --

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