※ 引述《coolmeow (誰能愛我100趴)》之銘言： : 非常感謝cc神大的解答 : 但在下真的非常才疏學淺孤陋寡聞 : 對於cc大的解釋還是有些地方不懂... : ※ 引述《ccsu (傑克)》之銘言： : : 好久沒有做實驗了，憑久遠的記憶試著幫你解答一下，如果有誤請大家鞭小力一點.. : : 1.EDC和NHS是活化COOH基用的，EDC先和COOH基反應，然後再由NHS和這個基團反應， : : 最後變成 R-C=O -NHS的反應基團，接下來就可以和帶有 R2-NH2的基團反應，變更 : : 穩定的 R-C=O -NH -R2 鍵結 : 請問R2的2下標嗎 = =? R2是指什麼呢? : 我只知道R在有機化學裡可以代替火巠類或烷類但其實不知其真正的意思 : 請cc大將在下的程度自動歸類到高中的基礎化學以下....XD : 或是哪裡有網站有詳細資料也請指導一下 : : 2.NHS和EDC用水就可以溶解了 : : 3.會啊，這就是所謂的Self assembly monolayer，可以去google一下相關原理，不過 : : 如果我沒記錯，成不成功和水溫和壓力的因素不大，和碳鏈的長短和浸泡時間關係 : : 比較大... : : 4.PBS就是phosphorate buffer saline，要選哪一種基本上和你未來的實驗設計比較 : : 有關吧... : 在下只是需要一些試片來測試一部很陽春的SPR是否可以scan到反射角度位移 : 的功能而已 所以當BSA接上Au後 化學反應的部份就是到這裡完成了 : 接下就是量測部分 : 所以目前的實驗設計簡約來說 就是要將MHDA接到Au上 再將BSA接到COOH基上.. : : 5.同4，和你實驗設計比較有關，不然隨便加一加也會溶解 : : 6.Tween是一種介面活性劑，他是商品名，依照不同的特性有Tween-20，Tween-80...等 : : 很多種類，主要是避免非特異性吸附用的... : 請問什麼是"非特異性吸附"......囧 : 希望對您有幫助，如果有誤也請其他神人補充改正一下... : 抱歉又丟了一堆問題出來 : 請cc大不厭麻煩的再幫我解釋一次 : (叩恩) 關於R2-NH2的問題，就像另一位大大說的，只是代表另一個反應物而已，所以你要接 BSA 上去，R2-NH2 就代表BSA這個蛋白質上其中一段胺基酸側鏈(如Lysine)或是 N端 而已，不用想的太複雜 特異性吸附就像抗原-抗體的反應，一個抗體只會和其相對應的抗原結合，碰到其他的 東西就不會結合在一起，而非特異性吸附就剛好相反，不管啥東西都會亂黏上去，就像 你今天想測BSA的結合，如果在你的樣品中有其他阿貓阿狗的東西也會黏在你的SPR上面 ，你就不曉得測到的反射角度位移是因為BSA結合產生，還是因為阿貓阿狗的結合產生， 所以我們會在反應的Buffer裡面加一些Tween(好像比較常用Tween-20的樣子)，因為它是 界面活性劑，可以把阿貓阿狗包起來，降低他和SPR亂黏的情形，讓你測到的信號都是來 自BSA的結合 至於PBS的選擇，另一位大大講很多了，我就不多說了，關於化學反應的部份，你可以去 pierce公司網站看看(就是那位大大提供的連結)，他把原理講的很詳細，不過可惜東西 太貴，以前我們都碼是看PIERCE的說明書，買SIGMA的藥品來反應... 其他的部份就請其他大大補充囉，不過我比較好奇的是你接完BSA，還買抗體來和BSA反 應看反射角度位移嗎？還是單純測量每一步反應對反射角的影響呢？Anyway, 祝你實驗 順利啦~~ --

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