※ 引述《coolmeow (谁能爱我100趴)》之铭言： : 非常感谢cc神大的解答 : 但在下真的非常才疏学浅孤陋寡闻 : 对於cc大的解释还是有些地方不懂... : ※ 引述《ccsu (杰克)》之铭言： : : 好久没有做实验了，凭久远的记忆试着帮你解答一下，如果有误请大家鞭小力一点.. : : 1.EDC和NHS是活化COOH基用的，EDC先和COOH基反应，然後再由NHS和这个基团反应， : : 最後变成 R-C=O -NHS的反应基团，接下来就可以和带有 R2-NH2的基团反应，变更 : : 稳定的 R-C=O -NH -R2 键结 : 请问R2的2下标吗 = =? R2是指什麽呢? : 我只知道R在有机化学里可以代替火巠类或烷类但其实不知其真正的意思 : 请cc大将在下的程度自动归类到高中的基础化学以下....XD : 或是哪里有网站有详细资料也请指导一下 : : 2.NHS和EDC用水就可以溶解了 : : 3.会啊，这就是所谓的Self assembly monolayer，可以去google一下相关原理，不过 : : 如果我没记错，成不成功和水温和压力的因素不大，和碳链的长短和浸泡时间关系 : : 比较大... : : 4.PBS就是phosphorate buffer saline，要选哪一种基本上和你未来的实验设计比较 : : 有关吧... : 在下只是需要一些试片来测试一部很阳春的SPR是否可以scan到反射角度位移 : 的功能而已 所以当BSA接上Au後 化学反应的部份就是到这里完成了 : 接下就是量测部分 : 所以目前的实验设计简约来说 就是要将MHDA接到Au上 再将BSA接到COOH基上.. : : 5.同4，和你实验设计比较有关，不然随便加一加也会溶解 : : 6.Tween是一种介面活性剂，他是商品名，依照不同的特性有Tween-20，Tween-80...等 : : 很多种类，主要是避免非特异性吸附用的... : 请问什麽是"非特异性吸附"......囧 : 希望对您有帮助，如果有误也请其他神人补充改正一下... : 抱歉又丢了一堆问题出来 : 请cc大不厌麻烦的再帮我解释一次 : (叩恩) 关於R2-NH2的问题，就像另一位大大说的，只是代表另一个反应物而已，所以你要接 BSA 上去，R2-NH2 就代表BSA这个蛋白质上其中一段胺基酸侧链(如Lysine)或是 N端 而已，不用想的太复杂 特异性吸附就像抗原-抗体的反应，一个抗体只会和其相对应的抗原结合，碰到其他的 东西就不会结合在一起，而非特异性吸附就刚好相反，不管啥东西都会乱黏上去，就像 你今天想测BSA的结合，如果在你的样品中有其他阿猫阿狗的东西也会黏在你的SPR上面 ，你就不晓得测到的反射角度位移是因为BSA结合产生，还是因为阿猫阿狗的结合产生， 所以我们会在反应的Buffer里面加一些Tween(好像比较常用Tween-20的样子)，因为它是 界面活性剂，可以把阿猫阿狗包起来，降低他和SPR乱黏的情形，让你测到的信号都是来 自BSA的结合 至於PBS的选择，另一位大大讲很多了，我就不多说了，关於化学反应的部份，你可以去 pierce公司网站看看(就是那位大大提供的连结)，他把原理讲的很详细，不过可惜东西 太贵，以前我们都码是看PIERCE的说明书，买SIGMA的药品来反应... 其他的部份就请其他大大补充罗，不过我比较好奇的是你接完BSA，还买抗体来和BSA反 应看反射角度位移吗？还是单纯测量每一步反应对反射角的影响呢？Anyway, 祝你实验 顺利啦~~ --

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