作者q666 (蕾兒)
看板Biotech
標題[求救] BSA或奶粉做blocking?
時間Thu Nov 5 12:23:59 2009
我想請問
我在看PAPER會看到有人使用BSA或奶粉來當作blocking溶液
也有人使用Tween-20
為什麼呢?
它們的運用機制是什麼呢?
blocking的意思是???
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◆ From: 120.107.165.134
1F：推 silverberry:BSA 或 non-fat milk 是蛋白質 11/05 13:18
2F：→ silverberry:Tween-20 是 detergent 去除 non-specific binding 11/05 13:19
3F：推 celestial318:有用Tween-20 blocking的? 不是拿來wash而已嗎 11/05 13:38
4F：→ vandia:我們奶粉是泡在PBST裡面 11/05 14:03
※ 編輯: q666 來自: 120.107.165.134 (11/05 15:21)
5F：推 bluecsky:拿tween-20 blockingXDDDD 你應該看錯吧 11/05 17:50
6F：→ AngelMAyCry:我看過兩種說法，其一是blocking千萬不要加tween-20 11/05 18:15
7F：→ AngelMAyCry:不然background會很高，另一種說法是如果background太 11/05 18:16
8F：→ AngelMAyCry:高的話，就在blocking中加入tween-20 所以我也有點想 11/05 18:17
9F：→ AngelMAyCry:知道到底要不要加 11/05 18:17
10F：推 reinherd:通常是用5%milk做blocking, 如果是phosphorylated protei 11/06 01:48
11F：→ reinherd:改用5%BSA, 用Tween來block這我還是第一次聽說過 11/06 01:49
12F：→ Anvec:PBST 有加 Tween 20 呀 11/06 09:52
13F：→ Anvec:不過應該是避免 over-block 的問題吧 11/06 09:54
14F：→ Anvec:blocking 的目地是因為 PVDF membrane會跟我們的蛋白以及抗 11/06 09:58
15F：→ Anvec:體結合 所以壓片或呈色的時候就會整片都是 11/06 09:58
16F：→ Anvec:所以就要利用大量不會被抗體辨認的蛋白把膜上不是我們蛋白質 11/06 10:00
17F：→ Anvec:所在的地方覆蓋住 讓抗體不會隨變黏在 PVDF membrane 上 11/06 10:00
18F：推 tincta:奶粉泡在PBST裡面+1 11/06 22:15
19F：→ reinherd:不同公司的AB用不同的buffer泡 我們實驗室至少有用TBST 11/07 04:49
20F：→ reinherd:PBST 以及TNET來針對不同公司的AB下去配blocking 11/07 04:50
21F：推 hypnotics:確實有用Tween 20做blocking的protocol唷... 11/10 09:41