作者q666 (蕾儿)
看板Biotech
标题[求救] BSA或奶粉做blocking?
时间Thu Nov 5 12:23:59 2009
我想请问
我在看PAPER会看到有人使用BSA或奶粉来当作blocking溶液
也有人使用Tween-20
为什麽呢?
它们的运用机制是什麽呢?
blocking的意思是???
以方便板友帮您追踪问题
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.107.165.134
1F：推 silverberry:BSA 或 non-fat milk 是蛋白质 11/05 13:18
2F：→ silverberry:Tween-20 是 detergent 去除 non-specific binding 11/05 13:19
3F：推 celestial318:有用Tween-20 blocking的? 不是拿来wash而已吗 11/05 13:38
4F：→ vandia:我们奶粉是泡在PBST里面 11/05 14:03
※ 编辑: q666 来自: 120.107.165.134 (11/05 15:21)
5F：推 bluecsky:拿tween-20 blockingXDDDD 你应该看错吧 11/05 17:50
6F：→ AngelMAyCry:我看过两种说法，其一是blocking千万不要加tween-20 11/05 18:15
7F：→ AngelMAyCry:不然background会很高，另一种说法是如果background太 11/05 18:16
8F：→ AngelMAyCry:高的话，就在blocking中加入tween-20 所以我也有点想 11/05 18:17
9F：→ AngelMAyCry:知道到底要不要加 11/05 18:17
10F：推 reinherd:通常是用5%milk做blocking, 如果是phosphorylated protei 11/06 01:48
11F：→ reinherd:改用5%BSA, 用Tween来block这我还是第一次听说过 11/06 01:49
12F：→ Anvec:PBST 有加 Tween 20 呀 11/06 09:52
13F：→ Anvec:不过应该是避免 over-block 的问题吧 11/06 09:54
14F：→ Anvec:blocking 的目地是因为 PVDF membrane会跟我们的蛋白以及抗 11/06 09:58
15F：→ Anvec:体结合 所以压片或呈色的时候就会整片都是 11/06 09:58
16F：→ Anvec:所以就要利用大量不会被抗体辨认的蛋白把膜上不是我们蛋白质 11/06 10:00
17F：→ Anvec:所在的地方覆盖住 让抗体不会随变黏在 PVDF membrane 上 11/06 10:00
18F：推 tincta:奶粉泡在PBST里面+1 11/06 22:15
19F：→ reinherd:不同公司的AB用不同的buffer泡 我们实验室至少有用TBST 11/07 04:49
20F：→ reinherd:PBST 以及TNET来针对不同公司的AB下去配blocking 11/07 04:50
21F：推 hypnotics:确实有用Tween 20做blocking的protocol唷... 11/10 09:41