作者june0101 (JUNE)
看板Biotech
標題[討論] 請教蛋白質denature的問題
時間Sun Nov 1 20:12:18 2009
請問大家
為何跑SDS PAGE時 要把protein denature呢
不了解將雙硫鍵打斷的目的是什麼??
然後 protein sample buffer 中的還原劑
用 DTT 配製是否有該注意的保存問題呢?
我知道 DTT 的還原力很強 然而他本身卻也不太穩定
冷凍在 -20 冰箱幾個月後卻變色了 (從藍色變成黃色)
査了一些資料是說 DTT 在 PH7 時才發揮作用
那我的 sample buffer 是否也不能用了呢?
因為不想一直重配 想釐清其中的疑點
還請有經驗的前輩指教 謝謝~
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◆ From: 123.240.87.178
1F：推 PAGBR:打斷雙硫鍵讓分子變小 11/01 23:06
2F：→ yuasa:得先破壞蛋白質的三四級結構，否則在膠體內游動的速率會受到 11/01 23:35
3F：→ yuasa:影響 11/01 23:35
4F：→ seanbest:我也覺得是把結構破壞，讓所有的蛋白質在相同狀態起跑 11/01 23:46
5F：推 tsubasawolfy:SDS要完整包覆才可以代表這蛋白的大小-帶電量關係 11/02 00:11
6F：→ tsubasawolfy:另外DTT應該是透明的吧?(結凍是白色) 你的藍變黃 11/02 00:12
7F：→ tsubasawolfy:是加在sample buffer裡面了? 不嫌麻煩可以要用時再加 11/02 00:13