作者argyle (復刻回憶)
看板Biotech
標題[求救] 請問SDS-PAGE鑄膠和跑膠的問題
時間Thu Oct 29 22:15:41 2009
請問各位
1. 鑄膠的時候 resolving gel加進去之後 是馬上加酒精把下層膠壓住嗎?
等到差不多凝膠之後 是用倒的把酒精倒掉嗎??
(因為用來mix的燒杯裡還會剩一點膠 我發現膠凝了之後上面還會有一點液體耶???)
2. 學長是說做好的膠直接泡在自來水裡 冰在4度C
但是我爬文看到大家都說要泡在RO水或是稀釋的running buffer裡
因為我是一次做4片膠 前兩片通常都跑的都還不錯 後兩片就會變很醜
不知道是不是保存方法不對的關係??
3. 我是每個well都會loading一樣的體積 只有marker除外
但是我的marker越往下跑變越窄 要如何改善呢??
感激不盡!!
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◆ From: 118.160.170.174
1F：→ tsubasawolfy:泡太久SDS跟tris不是會析出嗎@@? 第三點蛋白濃度調低 10/29 22:21
2F：→ argyle:可是沒辦法一次做1片耶~ 你是說sample濃度調低嗎?? 10/29 22:23
3F：推 f9361046:第三點 是因為sample體積大於marker所以marker band會壓 10/29 22:28
4F：→ f9361046:縮 10/29 22:29
5F：→ f9361046:關於第一點 用倒的就可以不過要等酒精都乾掉才可以配上層 10/29 22:30
6F：→ f9361046:關於第二點 覺得後兩片不是因為保存有問題而是配膠有問題 10/29 22:31
7F：推 tsubasawolfy:sample體積不是一直都比marker多嗎... 10/29 22:32
8F：→ argyle:但是我如果load完marker再加sample buffer補到一樣體積的話 10/29 22:32
9F：→ argyle:marker就會被擠到兩個角落 跑出來的都好像中間斷掉一樣... 10/29 22:33
10F：推 f9361046:marker被擠壓到一定就不會越來越短 實在沒有必要補體積 10/29 22:39
11F：→ f9361046:抱歉沒辦法幫你解決問題 10/29 22:40
12F：→ argyle:我的marker是加3ul 會太少嗎?? (感謝樓上的經驗分享喔) 10/29 22:50
13F：推 liuse:阿你marker可以先取出來再加sample buffer到跟其他sample一 10/29 23:04
14F：→ liuse:樣的體積阿 10/29 23:04
15F：→ Anvec:關於第一點 注完馬上就壓嘍 用什麼都可以啦 凝了直接倒掉 10/30 10:32
16F：→ Anvec:有人用二次水 酒精 isopropanol iso-butanol 都有 10/30 10:32
17F：→ Anvec:那個不凝的部分是因為接觸到空氣 只要接觸到空氣就凝不完全 10/30 10:34
18F：→ Anvec:所以有的人的齒槽一直都會下縮 就是因為他的膠接觸到空氣 10/30 10:34
19F：→ Anvec:很久很久以前上課 好像是說因為 TEMED 被氧化掉了 10/30 10:35
20F：→ Anvec:關於第二點 冰冰箱裡不能冰太久 幾天內就用掉比較好 10/30 10:36
21F：→ Anvec:從冰箱裡拿出來要先回溫 讓析出的東西溶回去 XD 10/30 10:38
22F：→ Anvec:泡水可能會讓膠內的 SDS 跟 tris 濃度不太對 pH 值也會變 10/30 10:38
23F：→ Anvec:我以前也是用泡水的 現在改用濕的擦手紙包起來放夾鍊袋 10/30 10:39
24F：→ Anvec:第三點 不是用 sample buffer 是用溶樣品的 buffer 補體積 10/30 10:41
25F：→ Anvec:這是個人的小小經驗 囧a 10/30 10:43
26F：推 icome:膠用保鮮膜包好就好啦 通常頂多放一個晚上就用掉了 10/30 14:34
27F：推 mea7211:第二點同Anvec 不過擦手紙是用sample buffer浸溼的 10/30 16:22
28F：推 phyton:膠泡水存放的確要考慮被稀釋的問題，放個幾(<5)天倒也還好 10/30 17:36
29F：→ phyton:我通常也是用擦手紙包 10/30 17:36
30F：→ argyle:sample buffer不就是溶樣品的buffer嗎 (裡面有染劑的那個) 10/30 19:04
31F：→ argyle:還是大家說的是running buffer??(跑膠的時候要倒在槽裡的?) 10/30 19:05
32F：推 phyton:我想mea大應該是筆誤 用running buffer保存膠會比水好 10/31 08:32
33F：推 J0HAN:是說...為什麼不能一次做一片？@@" 11/03 11:32