作者argyle (复刻回忆)
看板Biotech
标题[求救] 请问SDS-PAGE铸胶和跑胶的问题
时间Thu Oct 29 22:15:41 2009
请问各位
1. 铸胶的时候 resolving gel加进去之後 是马上加酒精把下层胶压住吗?
等到差不多凝胶之後 是用倒的把酒精倒掉吗??
(因为用来mix的烧杯里还会剩一点胶 我发现胶凝了之後上面还会有一点液体耶???)
2. 学长是说做好的胶直接泡在自来水里 冰在4度C
但是我爬文看到大家都说要泡在RO水或是稀释的running buffer里
因为我是一次做4片胶 前两片通常都跑的都还不错 後两片就会变很丑
不知道是不是保存方法不对的关系??
3. 我是每个well都会loading一样的体积 只有marker除外
但是我的marker越往下跑变越窄 要如何改善呢??
感激不尽!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.160.170.174
1F：→ tsubasawolfy:泡太久SDS跟tris不是会析出吗@@? 第三点蛋白浓度调低 10/29 22:21
2F：→ argyle:可是没办法一次做1片耶~ 你是说sample浓度调低吗?? 10/29 22:23
3F：推 f9361046:第三点 是因为sample体积大於marker所以marker band会压 10/29 22:28
4F：→ f9361046:缩 10/29 22:29
5F：→ f9361046:关於第一点 用倒的就可以不过要等酒精都乾掉才可以配上层 10/29 22:30
6F：→ f9361046:关於第二点 觉得後两片不是因为保存有问题而是配胶有问题 10/29 22:31
7F：推 tsubasawolfy:sample体积不是一直都比marker多吗... 10/29 22:32
8F：→ argyle:但是我如果load完marker再加sample buffer补到一样体积的话 10/29 22:32
9F：→ argyle:marker就会被挤到两个角落 跑出来的都好像中间断掉一样... 10/29 22:33
10F：推 f9361046:marker被挤压到一定就不会越来越短 实在没有必要补体积 10/29 22:39
11F：→ f9361046:抱歉没办法帮你解决问题 10/29 22:40
12F：→ argyle:我的marker是加3ul 会太少吗?? (感谢楼上的经验分享喔) 10/29 22:50
13F：推 liuse:阿你marker可以先取出来再加sample buffer到跟其他sample一 10/29 23:04
14F：→ liuse:样的体积阿 10/29 23:04
15F：→ Anvec:关於第一点 注完马上就压喽 用什麽都可以啦 凝了直接倒掉 10/30 10:32
16F：→ Anvec:有人用二次水 酒精 isopropanol iso-butanol 都有 10/30 10:32
17F：→ Anvec:那个不凝的部分是因为接触到空气 只要接触到空气就凝不完全 10/30 10:34
18F：→ Anvec:所以有的人的齿槽一直都会下缩 就是因为他的胶接触到空气 10/30 10:34
19F：→ Anvec:很久很久以前上课 好像是说因为 TEMED 被氧化掉了 10/30 10:35
20F：→ Anvec:关於第二点 冰冰箱里不能冰太久 几天内就用掉比较好 10/30 10:36
21F：→ Anvec:从冰箱里拿出来要先回温 让析出的东西溶回去 XD 10/30 10:38
22F：→ Anvec:泡水可能会让胶内的 SDS 跟 tris 浓度不太对 pH 值也会变 10/30 10:38
23F：→ Anvec:我以前也是用泡水的 现在改用湿的擦手纸包起来放夹链袋 10/30 10:39
24F：→ Anvec:第三点 不是用 sample buffer 是用溶样品的 buffer 补体积 10/30 10:41
25F：→ Anvec:这是个人的小小经验 囧a 10/30 10:43
26F：推 icome:胶用保鲜膜包好就好啦 通常顶多放一个晚上就用掉了 10/30 14:34
27F：推 mea7211:第二点同Anvec 不过擦手纸是用sample buffer浸湿的 10/30 16:22
28F：推 phyton:胶泡水存放的确要考虑被稀释的问题，放个几(<5)天倒也还好 10/30 17:36
29F：→ phyton:我通常也是用擦手纸包 10/30 17:36
30F：→ argyle:sample buffer不就是溶样品的buffer吗 (里面有染剂的那个) 10/30 19:04
31F：→ argyle:还是大家说的是running buffer??(跑胶的时候要倒在槽里的?) 10/30 19:05
32F：推 phyton:我想mea大应该是笔误 用running buffer保存胶会比水好 10/31 08:32
33F：推 J0HAN:是说...为什麽不能一次做一片？@@" 11/03 11:32