作者mythos (壁上土)
看板Biotech
標題Re: [求救] 10X TBE buffer
時間Wed Oct 28 20:36:08 2009
TBE 不用調 pH .. 我還沒看過哪本書或 protocol 說要調的
(順手翻了一下 Molecular Cloning 跟 Wiley 的 Current Protocols 確認..XD)
那個 8.0 是 EDTA solution 的 不是 final pH
照配方配起來的 TBE stock solution pH 大約 8.3
會隨溫度加減一點 但都在一般電泳的適用範圍內
調到 8.0 .. 我相信你也加了不少 HCl 了吧
它應該已經失去緩衝能力了 (跑完電泳用試紙測兩極的 pH 看看)
用強鹼調回 8.3 或許能救回緩衝能力
但離子濃度升高了 東西跑起來會變慢一些
稀釋成 0.25X 跑跑 DNA agarose gel 應該還沒問題
至於跑蛋白質電泳的話 氯離子好像會干擾聚焦
能接受的話就OK
若是不敢用想整瓶倒掉
1L 10X TBE solution 試藥費大概三百塊左右
有過 filter 的再加幾十到幾百塊
老闆人很好的話就倒吧
以上為個人經驗
如有謬誤 懇請指正
※ 引述《bluecsky (我要藍藍淡淡的天空)》之銘言：
: 我使用的配方是這樣的
: for 1L
: 108g Tris base
: 55g Boric acid
: 40mls 0.5M EDTA (pH 8.0)
: 但是現在出現一些問題
: 主要是我跑gel後都會發生 在中後段的band出現嚴重的偏移
: 電壓確定沒有太高 buffer也沒有過熱(我在冷房跑)
: 不過我之前也有跑過好一陣子的TBE gel
: 卻沒有這個問題
: 我仔細回想兩次的差異是
: 我第一次配的時候 就直接混好溶解定體積後就拿來使用了
: 而第二次配的時候 因為學長提醒我要調整pH值到8
: 所以我就使用了HCl調整pH至8.0
: 想問的問題是...究竟這配起來是不是有需要再調一次pH值?
: 因為目前看起來 有調過的似乎無法順利得跑
: 難道第一次糊里糊塗的配法才是正確的?
: 先感謝各位的回答跟觀看..
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◆ From: 114.45.221.40
1F：推 pettra:推 8.0 是 EDTA solution的，不是最終濃度，照protocal 10/28 21:48
2F：→ pettra:配完不用再調整pH值。 是說如果怕浪費，還是不要拿來跑蛋白 10/28 21:51
3F：→ pettra:sample，就稀釋拿來跑DNA吧.... 10/28 21:52
4F：→ nike77114:個人建議還是倒掉，實驗作不出來後續浪費更多 10/29 00:50
5F：推 silverberry:TBE 的確是配完就不用調整 pH 值了 就像 TAE 一樣~ 10/29 03:12
6F：→ silverberry:我省時間的作法都是全部秤 powder 加到水裡面溶~ 10/29 03:13
7F：→ silverberry:0.5 M EDTA stock 配起來很費時的 >"< 10/29 03:13
8F：推 bluecsky:感謝 我確定我被唬了 因為學長自己也沒調.. 10/29 07:33
9F：→ bluecsky:他的說法是 : 配起來就差不多pH 8..= = 10/29 07:34
10F：→ bluecsky:算了 我已經決定倒掉重配 已經失敗兩三次了 10/29 07:34
11F：→ bluecsky:我後來也查了不少配方 好像都沒有要調的.. 10/29 07:51
12F：推 leoblack:建議倒掉~不然後面賠上的是更多的實驗時間跟金錢!!! 10/29 16:24