作者mythos (壁上土)
看板Biotech
标题Re: [求救] 10X TBE buffer
时间Wed Oct 28 20:36:08 2009
TBE 不用调 pH .. 我还没看过哪本书或 protocol 说要调的
(顺手翻了一下 Molecular Cloning 跟 Wiley 的 Current Protocols 确认..XD)
那个 8.0 是 EDTA solution 的 不是 final pH
照配方配起来的 TBE stock solution pH 大约 8.3
会随温度加减一点 但都在一般电泳的适用范围内
调到 8.0 .. 我相信你也加了不少 HCl 了吧
它应该已经失去缓冲能力了 (跑完电泳用试纸测两极的 pH 看看)
用强硷调回 8.3 或许能救回缓冲能力
但离子浓度升高了 东西跑起来会变慢一些
稀释成 0.25X 跑跑 DNA agarose gel 应该还没问题
至於跑蛋白质电泳的话 氯离子好像会干扰聚焦
能接受的话就OK
若是不敢用想整瓶倒掉
1L 10X TBE solution 试药费大概三百块左右
有过 filter 的再加几十到几百块
老板人很好的话就倒吧
以上为个人经验
如有谬误 恳请指正
※ 引述《bluecsky (我要蓝蓝淡淡的天空)》之铭言：
: 我使用的配方是这样的
: for 1L
: 108g Tris base
: 55g Boric acid
: 40mls 0.5M EDTA (pH 8.0)
: 但是现在出现一些问题
: 主要是我跑gel後都会发生 在中後段的band出现严重的偏移
: 电压确定没有太高 buffer也没有过热(我在冷房跑)
: 不过我之前也有跑过好一阵子的TBE gel
: 却没有这个问题
: 我仔细回想两次的差异是
: 我第一次配的时候 就直接混好溶解定体积後就拿来使用了
: 而第二次配的时候 因为学长提醒我要调整pH值到8
: 所以我就使用了HCl调整pH至8.0
: 想问的问题是...究竟这配起来是不是有需要再调一次pH值?
: 因为目前看起来 有调过的似乎无法顺利得跑
: 难道第一次糊里糊涂的配法才是正确的?
: 先感谢各位的回答跟观看..
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.221.40
1F：推 pettra:推 8.0 是 EDTA solution的，不是最终浓度，照protocal 10/28 21:48
2F：→ pettra:配完不用再调整pH值。 是说如果怕浪费，还是不要拿来跑蛋白 10/28 21:51
3F：→ pettra:sample，就稀释拿来跑DNA吧.... 10/28 21:52
4F：→ nike77114:个人建议还是倒掉，实验作不出来後续浪费更多 10/29 00:50
5F：推 silverberry:TBE 的确是配完就不用调整 pH 值了 就像 TAE 一样~ 10/29 03:12
6F：→ silverberry:我省时间的作法都是全部秤 powder 加到水里面溶~ 10/29 03:13
7F：→ silverberry:0.5 M EDTA stock 配起来很费时的 >"< 10/29 03:13
8F：推 bluecsky:感谢 我确定我被唬了 因为学长自己也没调.. 10/29 07:33
9F：→ bluecsky:他的说法是 : 配起来就差不多pH 8..= = 10/29 07:34
10F：→ bluecsky:算了 我已经决定倒掉重配 已经失败两三次了 10/29 07:34
11F：→ bluecsky:我後来也查了不少配方 好像都没有要调的.. 10/29 07:51
12F：推 leoblack:建议倒掉~不然後面赔上的是更多的实验时间跟金钱!!! 10/29 16:24